[发明专利]一种体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法

说明书

一种体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，通过人工合成带上荧光的病毒，且带上荧光的病毒能靶向感染活性上皮肿瘤细胞；将带上荧光的病毒注入体外的人体混合液中，带上荧光的病毒将在上皮肿瘤细胞中复制，荧光被放大，通过对混合液中带上荧光病毒的识别，定位上皮肿瘤细胞，达到对上皮肿瘤细胞的检测；利用病毒靶向感染活性上皮细胞的特性，以及病毒携带荧光，并复制放大荧光的多重特性提高上皮肿瘤细胞在特定混合液中被发现的敏感性和特异性进行上皮肿瘤细胞的检测。

技术领域

本发明涉及到一种细胞的检测方法，具体涉及到一种体外活性上皮肿瘤细胞的检测方法，主要用于活性上皮肿瘤细胞检测，并从体外混合液中检测出活性上皮肿瘤细胞的存在。属生物医药技术领域。

背景技术

肿瘤是当今威胁人类健康的重大疾病之一，早发现、早治疗是当前的研究热点，但各种原因仍使大多数患者发现时已属晚期，肿瘤产生转移，病人则患有不治之症。据报道当前我国每年新发现肿瘤400多万，死亡280万。其中约70%左右的肿瘤是源于上皮发生的恶性肿瘤。

这种肿瘤可以从原发灶脱落进入淋巴液、血液、腹膜腔、胸膜腔、脑脊液而产生转移，也可以出现在尿液、唾液、大便中。如果能高效发现这些混合液中的上皮肿瘤细胞将有助于疾病的诊断、预后的判断和疗效监测。当前发现上皮肿瘤细胞的方法主要有两类技术：一是化学方法，原理是寻找上皮肿瘤细胞的标志物，利用标志物来鉴定上皮肿瘤细胞，这种方法由于肿瘤细胞的高度异质性 及上皮可转化为间质的特性，灵敏度及特异度会受一定的影响，临床推广有限；二是物理方法，原理是利用肿瘤细胞大小、形状的改变进行鉴定，这种方法鉴定单个肿瘤细胞较为困难。因此，研究新方法检测活性上皮肿瘤细胞是解决上皮类肿瘤诊断的关键。

通过专利检索没发现有与本发明相同技术的专利文献报道，与本发明有一定关系的专利主要有以下几个：

1、专利号为CN200980153704.X，名称为“鉴定、选择和分析肿瘤细胞的方法” 的发明专利，该专利公开了一种诊断肿瘤状况和/或相应的肿瘤发展状况的方法，其中从患者获取有机液体样本富集在CTC或DTC群中，所述有机液体具有含至少一种循环肿瘤细胞(CTC)或扩散肿瘤细胞(DTC)或其部分的可能性高。根据本发明，CTC或DTC中至少一种类型是通过在微流体装置中逐个选择单个细胞分离的，以便形成纯度至少为90％的诊断样本。对这样获得的样本随后执行分子分析，以便突出其中适于能够进行诊断的特征。

2、专利申请号为CN201710492563.0，名称为“外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统” 发明专利，该专利公开了一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统。其中，该方法包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。该专利的技术方案，能够快速、高效地将人的体液样品中的所有红细胞与血液中的其它有核白细胞包括淋巴瘤细胞进行有效分离，不会对人血液内的各种细胞(包括肿瘤细胞)产生任何影响，从而很好地保持了原有的细胞形态，以极大地便于利用流式细胞仪进行肿瘤细胞分选以及后续的鉴别与判断。

3、专利申请号为CN201410810209.4，名称为“ 一种ACAP4活性抑制蛋白的鉴定及其在细胞迁移中的作用”的发明专利，该专利公开了一种ACAP4活性抑制蛋白的鉴定及其在细胞迁移中的作用。其目的是提供一种ACAP4活性抑制蛋白及其编码基因与其在制备抑制肿瘤转移药物中的应用。该蛋白是下述氨基酸序列之一：1)序列表中的SEQ ID NO.1；2)将序列表中SEQ ID NO.1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且对ACAP4和ARF6活性具有调节作用的蛋白质。该蛋白是ACAP4活性抑制蛋白，它可以通过调节和ACAP4结合能力及其底物ARF6的活性来发挥信号通路的作用，调控肿瘤细胞的迁移功能。因此，可以其为药物靶标进行小分子化合物的筛选，发掘可能抑制肿瘤细胞转移的药物。