[发明专利]一种染色体滴片制作方法

说明书

本发明属于细胞遗传物质染色设备技术领域，公开了一种染色体滴片的制作方法，染色体滴片制作方法包括：滴片前将滴片室的温度控制在25℃‑27℃，湿度控制在40％‑60％；滴片前三个小时内将滴片室的空调和加湿器打开，控制滴片室的温度和湿度；在滴片完成前不在打开滴片室门窗，让室内温湿度保持恒定；滴好的片放在铁板上分散，待片干透再收好放入烤箱。本发明固定了滴片的温湿度后制出的片细胞比较胀大，染色体分散均匀且不粘连，几乎没有染色体在包浆内，且消化染色体时间比较固定，染色体制片质量有很大的提高。

技术领域

本发明属于细胞遗传物质染色设备技术领域，尤其涉及一种染色体滴片制作方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

由于染色体滴片制作是纯手工操作，影响制片质量的因素很多，滴片制作环节对染色体分散效果影响较大，滴片时染色体分散程度和冰乙酸挥发带走水份有很大关系。

染色体是基因的载体，具有储存和传递遗传信息的作用，人类细胞遗传学研究的主要对象是染色体，生物体细胞染色体数目和结构是重要的遗传标志之一。因此，在染色体的分析研究中，制备染色体标本无疑是细胞遗传学最基本而重要的技术。优良的染色体制片方法，良好的染色体扩散是基础细胞遗传学研究的根本。

染色体制片是染色体核型分析过程中的一个重要环节，理想的核型中染色体应分散均匀，无互相交叠才便于核型分析。滴片时的温度和湿度是染色体分散良好的关键条件。

细胞遗传学家普遍认为，滴片环境的温度和湿度是影响中期染色体分散质量的重要因素。德国friedrichschiller大学Grummt UW说，有经验的细胞遗传学家都非常清楚的认识到中期染色体的分散质量主要决定于载玻片上固定液(甲醇-冰醋酸)的挥发过程，而这一过程主要受环境的温度和相对湿度的影响。无独有偶，中国香港大学的Wen Deng也认为载玻片表面的湿度是影响染色体分散质量的最重要因素。美国的Jack L.Spurbeck则认为，通过不同温度和相对湿度的协同作用，可以保证最佳中期染色体分散面积。意大利学者Terzoli.G认为中期染色体有时不完整，染色体丢失；有时受细胞质干扰严重，显带质量差。这是因为，在天气变化的过程中，没有适当的环境调控措施。此类变化将是实验中的常见问题。

为了探究环境温度和相对湿度对中期染色体分散质量的影响，遗传学家利用相差显微镜观察了滴片后固定液干燥的全过程。在相差显微镜下观察滴片时载玻片干燥的过程，可以描述为五个步骤：(1)细胞悬液在载玻片上扩散时，细胞向各个方向随机飘动，但当细胞最终接触到玻璃表面时，细胞迅速固定到玻片表面。此时染色体不扩散，细胞看起来像小灰球。(2)固定液开始挥发，当固定液的表面接触到细胞表面时，细胞反光，周围有明亮的光圈。染色体完全不分散。宏观上看，载玻片表面变为粒状。(3)因为染色体的扩散，有丝分裂期的细胞比非有丝分裂期的细胞更快的失去光圈和展平。染色体在这一时期变得暗而可见，染色体扩散的大部分是在这一步完成的。非有丝分裂期的细胞仍有光圈，说明核膜及其内容物对挥发的固定液的展平效用有更强的耐受性。(4)随着固定液的挥发，非有丝分裂期细胞继续展平，同时染色体也有小幅度的扩散(不超过中期分裂相扩散直径的7％)。(5)微量的固定液围绕着各个细胞，但是迅速挥发。可见的染色体扩散停止，但是不排除继续进行细小的改变。

由上可知，中期染色体的扩散主要是在固定液干燥的过程中完成的。因此，若想提高染色体的分散度，从理论上来讲，我们可以通过减慢固定液的挥发速度，延长固定液挥发的时间，得到分散良好的中期分裂相。固定液挥发过快时，染色体分散不开，交叠在一起，对核型分析不利。固定液挥发速度合适时，能够得到分散良好的中期染色体，染色体重叠数少，断裂数少，缺失数少。固定液挥发过慢时，染色体容易断裂，卷曲，缺失，虽然分散面积较大，但是同样不利于染色体核型分析。

环境中的相对湿度，影响着固定液的挥发速度。当温度不变时，相对湿度越高，固定液挥发越慢，理论上染色体的分散度就越大；相对湿度越低，固定液挥发越快，染色体的分散度就越小。