[发明专利]一种产细菌素的凝结芽孢杆菌及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种产细菌素的凝结芽孢杆菌及其制备方法和应用，属于微生物领域。所述产细菌素的凝结芽孢杆菌于2017年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2017811。所述方法包括：1)在酵素源材料中经过分离和纯化后得到多个乳酸菌，所述酵素源材料由新谷酵素株式会社生产；2)筛选步骤1)所得的所述乳酸菌，得到所述产细菌素的凝结芽孢杆菌。该产细菌素的凝结芽孢杆菌可以应用于食品领域，同时，该产细菌素的凝结芽孢杆菌能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，在酸性及中性条件下均具有良好的抑菌效果，同时，具有良好的热稳定性。

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别涉及一种产细菌素的凝结芽孢杆菌及其制备方法和应用。

背景技术

细菌素(Bacteriocin)是细菌在代谢过程中由核糖体合成的。细菌素是由基因编码的一类具有抑菌活性的多肽或蛋白质。细菌素具有高效、无毒、耐高温、无残留、无抗药性及良好的生物相容性等优点，使其作为绿色生物防腐剂在农产品和其它食品的保藏和农作物安全生产中倍受关注。考虑到细菌素产生菌的产量及细菌素的安全性，到目前为止，只有乳酸菌产生的细菌素可作为绿色防腐剂应用于食品行业。

乳酸菌在其代谢过程中能够产生乳酸、乙酸等有机酸，这些化学物质能抑制其它微生物的生长，很多乳酸菌还能产生蛋白质或肽类抑菌物质细菌素。和目前市场上广泛使用的食品级防腐剂(例如：苯甲酸和山梨酸)相比，乳酸菌产生的细菌素具有易分解、无残留、无抗性、无毒副作用等优点。目前已经发现的乳酸链球菌素(Nisin)被批准应用于食品中，并实现了工业化生产。由于乳酸链球菌素仅对部分革兰氏阳性菌有抑制作用，且在中性条件下抑菌性差，热稳定性差，这限制了乳酸链球菌素在食品防腐保鲜中的应用。

发明内容

为了解决现有技术中的乳酸链球菌素仅对部分革兰氏阳性菌有抑制作用，且在中性及碱性条件下抑菌性差、稳定性差的问题，本发明实施例提供了一种产细菌素的凝结芽孢杆菌及其制备方法和应用。所述技术方案如下：

一方面，本发明实施例提供了一种产细菌素的凝结芽孢杆菌，所述产细菌素的凝结芽孢杆菌于2017年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2017811。

具体地，所述产细菌素的凝结芽孢杆菌的16SrDNA的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

另一方面，本发明实施例提供了一种产细菌素的凝结芽孢杆菌的制备方法，所述制备方法包括：

1)将酵素源材料经过分离和纯化后得到多个乳酸菌，所述酵素源材料由新谷酵素株式会社生产；

2)筛选步骤1)所得的所述乳酸菌，得到所述产细菌素的凝结芽孢杆菌。

具体地，所述分离和纯化的方法包括：

将所述酵素源材料与无菌水按照1:100的质量比进行混合，得到混合液；

将所述混合液进行梯度稀释，得到浓度不同的稀释液；

将所述浓度不同的稀释液分别在第一乳酸细菌固体培养基上培养，得到多个待纯化的乳酸菌；

将所述多个待纯化的乳酸菌在第二乳酸细菌固体培养基上培养，得到多个纯化的乳酸菌。

进一步地，所述稀释液的浓度分别为：10^-4mg/L、10^-5mg/L、10^-6mg/L和10^-7mg/L。

进一步地，将带有所述稀释液的所述第一乳酸细菌固体培养基于30～40℃培养20～24h。优选地，37℃培养24h。

进一步地，将带有所述多个待纯化的乳酸菌的第二乳酸细菌固体培养基于30～40℃培养20～24h。优选地，37℃培养24h。