[发明专利]肉鸽致病菌沙门氏菌LAMP快速检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种鸽中致病性沙门氏菌快速现场检测的方法。所述的LAMP试剂盒，其特征是针对鸽中沙门氏菌设计致病性基因invA设计了2条LAMP外引物序列F3序列CGGCCCGATTTTCTCTGG和B3序列CGGCAATAGCGTCACCTT；2条内引物序列FIP序列GCGCAGCATCCGCATCAATAAT‑ATGGTATGCCCGGTAAACAG和BIP序列GAACGGCGAAGCGTACTGGA‑CATCGCACCGTCAAAGGAA。并且该LAMP试剂盒含外引物和内引物组成混合引物；dNTP；MgSO₄；BstDNA Polymerase Buffer；Bst DNA polymerase；Betaine；ddH₂O一支；染料一支。

技术领域

本技术针对肉鸽致病菌沙门氏菌invA基因设计的引物，发明了能够现场快速检测肉鸽致病菌沙门氏菌的LAMP试剂盒，效果好。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)病原体, 属肠杆菌科, 沙门氏菌属, 是一大群寄生于人和动物肠道中形态、培养特性、反应和抗原结构相似的革兰氏阴性杆菌。沙门氏菌(Salmonella)的活动力和抗性都很强，是一种重要的人畜共患病，对畜禽养殖产生极大危害。对鸽子而言，威胁普遍且大，是一种极为顽固的病菌，一旦污染便不容易将其彻底根除，对肉鸽养殖业的危害性很大。据报道，沙门氏菌属有2个种，分为42个群，2 500个血清型以上。而我国己报道的血清型有240种以上。不同物种感染的致病性沙门氏菌种类可能不一样。

目前禽源性沙门氏菌的研究较多集中于鸡源性沙门氏菌，发现引起禽类发病的沙门氏菌主要有鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌及其他有鞭毛能运动的多种沙门氏菌。但是目前对鸽源沙门氏菌的分子生物学研究非常有限，很少基于分子生物学的病原检测和鉴定方法，而大多仅限于沙门氏菌的临床鉴定和治疗。这与近年来肉鸽养殖规模不断扩大而不符合，造成对鸽沙门氏菌感染的误诊，易带来重大的损失。

LAMP技术是近几年来发展起来的一项分子生物学检测技术，相对于普通PCR和定量PCR等分子生物学检测方法，LAMP技术有许多明显的优点：恒温扩增，扩增阶段对仪器的要求低；视觉直观检测，不需要检测仪；反应速度快，敏感性高；用多个引物，特异性好；价格便宜。因此，LAMP扩增技术是一种新兴的核酸扩增方法，具有快速、简单、特异性强等特点。目前，LAMP技术已被应用在临床病原微生物检测、传染病监测领域等领域逐渐显示出巨大的应用潜力并正得到了日益广泛的运用。

近年来一些科技文献公开了一些沙门氏菌的LAMP检测方法，如：

中国专利<申请号>CN201310268305.6<发明名称>一种沙门氏菌LAMP引物组和试剂盒及检测方法<申请人>石磊;李艳莉;王珊珊;赵一鸣;张志刚;苏永裕;孟赫诚;闫鹤<联系地址>510640 广东省广州市天河区五山路381号<摘要>本发明公开了一种沙门氏菌LAMP引物组和试剂盒及检测方法，属于食品安全的分子生物学检测方法领域。本发明设计的一种沙门氏菌LAMP引物组包含检测引物组及内标引物组；检测试剂盒沙门氏菌LAMP引物组、DNA聚合酶、LAMP反应液、荧光核酸染料、内标、阳性对照和阴性对照。其检测方法是通过提取待检样品，在63～65℃对样品模板进行30～45min的扩增，不仅可检测待检样品是否含有沙门氏菌，同时可根据检测内标引物组是否有扩增来判断是否有假阴性检测结果。本发明具有快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度、适合现场检测等优点，并且可有效防止假阴性的发生，适于推广应用。