[发明专利]一种检测碱性磷酸酶的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备及其应用

权利要求书

1.一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的水溶性荧光硅纳米颗粒是由N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺和苯二酚合成得到。

2.如权利要求1所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的苯二酚为对苯二酚、间苯二酚或者邻苯二酚。

3.如权利要求1所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的苯二酚为对苯二酚，所述的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备方法包括：

（1）将N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺加入水中；

（2）加入对苯二酚并搅拌即可获得黄色荧光水溶性荧光硅纳米颗粒yellow-Si NPs；

（3）将制备得到的水溶性荧光硅纳米颗粒用500 Da的透析袋透析，即可获得纯化后的水溶性荧光硅纳米颗粒。

4.如权利要求3所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺和对苯二酚的摩尔比为1 ：10。

5.如权利要求1所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的苯二酚为间苯二酚，所述的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备方法包括：

（1）将N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺加入水中；

（2）加入间苯二酚并搅拌即可获得蓝色荧光水溶性荧光硅纳米颗粒blue-Si NPs；

（3）将制备得到的水溶性荧光硅纳米颗粒用500 Da的透析袋透析，即可获得纯化后的水溶性荧光硅纳米颗粒。

6.如权利要求5所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺DAMO和间苯二酚的摩尔比为1：140。

7.如权利要求1所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的苯二酚为邻苯二酚，所述的水溶性荧光硅纳米颗粒的制备方法包括：

（1）将N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺加入水中；

（2）加入邻苯二酚并搅拌即可获得橘色荧光水溶性荧光硅纳米颗粒orange-Si NPs；

（3）将制备得到的水溶性荧光硅纳米颗粒用500 Da的透析袋透析，即可获得纯化后的水溶性荧光硅纳米颗粒。

8.如权利要求2所述的一种水溶性荧光硅纳米颗粒用于检测碱性磷酸酶,其特征在于，所述的N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺和邻苯二酚的摩尔比为1：6。

9.一种用水溶性荧光硅纳米颗粒的检测碱性磷酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在2.83 mL pH 7.4, 10 mM Tris-HCl 缓冲溶液中加入30 μL 0.7 mol/L维生素C磷酸酯AAP 和不同浓度的碱性磷酸酶ALP，置于 37°C 水浴中孵化 25 分钟；

(2)在上述溶液中依次加入20 μL 权利要求7所制备的orange-Si NPs溶液， 90 μL 10mM KMnO₄溶液；

(3)设定激发和发射的狭缝宽度均为5 nm、激发波长为481 nm，在发射波长为558 nm处测定荧光强度orange-Si NPs + KMnO₄溶液的荧光强度为F₁，orange-Si NPs + KMnO₄ +AAP + ALP溶液的荧光强度为F₂，以F₂-F₁为纵坐标，logc_ALP为横坐标，制作标准工作曲线。

10.如权利要求9所述的一种包含水溶性荧光硅纳米颗粒的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于，所述的检测碱性磷酸酶的探针可应用于血清中碱性磷酸酶的检测，包括以下步骤：

(1)将购买的人血清样品用pH 7.4, 10 mM Tris-HCl 缓冲溶液稀释100倍，加入30 μL0.7 mol/L AAP和30 μL 各种浓度的ALP，最终总体积为2.89 mL, 置于 37°C 水浴中孵化25 分钟；

(2)在上述溶液中依次加入20 μL 所制备的orange-Si NPs溶液， 90 μL 10 mM KMnO₄溶液；

(3)设定激发和发射的狭缝宽度均为5 nm、激发波长为481 nm，在发射波长为558 nm处测定荧光强度；

(4)根据荧光强度和标准曲线计算ALP的含量。