[发明专利]血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法

权利要求书

1.检测血清脂质生物标志物组合的产品在制备NSCLC早期诊断制品中的应用，其特征在于：所述血清脂质生物标志物组合为PE(16:0/16:1)、PE(16:0/18:3)、PE(16:0/18:2)、PE(18:0/16:0)、PE(17:0/18:2)、PE(18:0/17:1)、PE(17:0/18:1)、PE(20:5/16:0)、PE(18:0/18:1)、PE(18:1/20:4)、PE(18:0/20:3)、PC(15:0/18:1)、PC(16:1/20:5)和PC(18:0/20:1)，所述血清脂质生物标志物组合通过如下步骤鉴定得到：

(1)收集NSCLC患者、肺良性病变患者和正常人的血清样本；

(2)对血清样本预处理，并采用超高效液相-四级杆-飞行时间质谱的方法检测各血清样本中脂质代谢标志物，获得脂质代谢指纹图谱；

(3)通过多元变量模式识别分析的方法进行NSCLC相关差异脂质代谢标志物的筛选；

(4)通过NSCLC差异脂质代谢物的KEGG分析和代谢通路分析，筛选出与脂质代谢物相关性最高的关键代谢通路；

(5)进行NSCLC差异脂质代谢物的“基因-酶-反应-代谢物”网络分析，获得NSCLC差异脂质代谢物网络图；

(6)综合NSCLC差异脂质代谢标志物筛选及代谢通路分析结果，筛选获得NSCLC血清早期诊断脂质生物标志物；

(7)对筛选出的NSCLC血清早期诊断脂质生物标志物重复步骤(1)-(6)进行靶标定量验证和确认。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(1)中的样本收集具体为：空腹采集NSCLC患者、肺良性病变患者和正常人肘部静脉血5mL于无菌促凝真空采血管中，2500r/min，4℃离心5min，取上层血清，保存于-80℃冰箱中待用。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(2)中血清样本预处理为：将低温保存的血清样本置室温解冻摇匀，取100μL的样本加入480μL甲基叔丁基醚-甲醇提取液，涡漩震荡30s，静置1h；3000r/min离心15min，取400μL甲基叔丁基醚层蒸干，100μL二氯甲烷：甲醇复溶，进行UPLC-Q-TOF/MS检测分析；同时每个样本各取10μL混合成质控样本，与样本同批次检测。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：超高效液相-四级杆-飞行时间质谱采用Agilent 1290超高效液相色谱仪和AB Sciex 6600三重飞行时间质谱仪。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：步骤(2)中液相色谱-质谱条件为：Phenomenex Kinetex C18 100 A柱，1.7μm，2.1×100mm，流速0.3ml/min，柱温为25℃；进样量为2μL，自动进样器温度4℃；流动相A：10mmol/L甲酸铵-40％水-60％乙腈，流动相B：10mmol/L甲酸铵-10％水-90％异丙醇；雾化气压力60psi，辅助气压力60psi，气帘气压力30psi，离子源温度550℃，喷雾电压5000V/-4500，去簇电压100V，碰撞电压10eV。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤(2)中采集的液相质谱数据包括一级质谱数据和二级质谱数据，其中在每个数据采集循环中，筛选出强度最强且大于100的分子离子进行采集对应的二级质谱数据。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：步骤(2)和步骤(3)之间还设有数据处理步骤，该步骤为：采用AB SCIEX Analyst TF 1.7.1数据采集软件记录每个血清样本的总离子流色谱图进行可视化检查；数据首先使用MSconventer转换为mzXML格式；使用XCMS做峰寻找、峰对齐数据处理。

8.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于：步骤(3)中进行多元变量模式识别分析前需要进行数据预处理，具体为：对原始数据中的缺失值进行模拟，数值模拟方法为最小值二分之一法进行填补；数据标准化处理，利用每个样本的总离子流进行归一化。