[发明专利]一种猪瘟病毒亚单位疫苗及其制备方法和用途

说明书

本发明属生物医药技术领域，具体为一种猪瘟病毒亚单位疫苗及其制备方法和用途。本发明首先提供一株用于制备猪瘟病毒重组亚单位疫苗的马克斯克鲁维酵母重组菌株。该重组菌株是通过截取猪瘟病毒囊膜蛋白E2的抗原表位区域，经密码子优化获得猪瘟病毒mE2蛋白的编码序列，然后将其克隆到马克斯克鲁维酵母表达载体上并转化马克斯克鲁维酵母宿主菌株构建获得。本发明还提供制备猪瘟病毒亚单位疫苗的方法：利用mE2重组表达的马克斯克鲁维酵母重组菌株，经培养、离心、细胞破碎、分离纯化获得猪瘟病毒mE2蛋白抗原，纯化的抗原和佐剂复配制成猪瘟病毒重组亚单位疫苗。该猪瘟病毒mE2蛋白重组亚单位疫苗注射免疫可获得保护性IgG抗体，能够减少和预防猪瘟病毒感染所引起相关性疾病。

技术领域

本发明属生物医药技术领域，具体涉及利用马克斯克鲁维酵母重组制备猪瘟病毒囊膜蛋白mE2；还涉及猪瘟病毒重组亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

猪瘟(Swine Fever，SF)，又称猪霍乱或烂肠瘟，为了便于与非洲猪瘟相区别，欧洲又称之为古典猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)。猪瘟是由猪瘟病毒(Classical SwineFever Virus，CSFV)引起猪的一种高度接触性传染病。以发病急、高热稽留、细小血管变性，引起出血、梗塞和坏死和高死亡率等为主要特征。猪瘟病毒属于黄病毒科(Flaviviridae)，瘟病毒属(Pestivirus)成员。这个病毒属还有牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrheavirus，BVDV)和绵羊边界病病毒(Border disease virus， BDV)，可分别感染牛群和羊群，并造成严重的经济损失。猪瘟是国际兽疫局(OIE)规定的A类法定传染病之一。我国《家畜家禽防疫条例实施细则》中也将其列为一类传染病。目前我国CSF的流行形式发生了很大变化，猪瘟疫情出现了反弹，主要表现为持续感染和隐性感染的共存，典型猪瘟和非典型猪瘟的共存、免疫耐受和带毒综合征共存等新的特点。CSFV感染新生仔猪后，引起急性或慢性感染，并可造成妊娠母猪的带毒综合征，从而导致胎儿的胎盘感染及新生仔猪的先天感染等现象，仍是对我国养猪业威胁最大的传染病。

CSFV是有囊膜的单股正链RNA病毒。病毒粒子呈球形，直径为40-50 nm，其核心外有脂蛋白囊膜，囊膜表面有许多长达6-8 nm的糖蛋白纤突，其核衣壳由单独衣壳蛋白组成，呈二十面体对称结构。病毒粒子的内部含有40 nm的电子致密的核衣壳，似乎呈六角。CSFV由5' 端非编码区、一个大的开放性阅读框(Open reading frame，ORF)和3'端非编码区三部分组成。5' 端非编码区约为360-373 bp，是CSFV基因组中最保守的部分。3'端非编码区约有229-243 bp，其终止密码子后为可变区，其中有50bp长的区域富含AT，3' 端在CSFV种内也非常保守。CSFV ORF编码3898个氨基酸残基的多聚前体蛋白，在病毒或宿主细胞蛋白酶的作用下裂解为12种病毒成熟蛋白，包括4种结构蛋白(C(p14)、E^rns ( gp44/48El)、E1(gp33)、E2 ( gp53))和8种非结构蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NSS和NSSB)。E^rns、E1、E2 这3种糖蛋白的病毒粒子是以二硫键相连，形成二聚体结构，其中E^rns和E2可通过二硫键形成同源二聚体，分子质量大小约为100KD。E2和E1之间还可形成异源二聚体，分子质量大小约为75 KD，三者均存在于感染细胞和病毒粒子中。4种结构蛋白中，免疫价值最高的是E^rns和E2蛋白，目前已成功制备了猪瘟病毒的感染性克隆，可将其用于病毒的复制/致弱、致病机制、疫苗研发等的研究。