[发明专利]SAA1和或SAA2基因拷贝数变异在慢性乙肝及乙肝后肝硬化预后监测及诊断中的应用

权利要求书

1.检测SAA1和SAA2基因拷贝数变异的试剂在制备对慢性乙型肝炎进行预后诊断、对慢性乙型肝炎发展为乙肝后肝硬化进行早期诊断及预后判断的产品中的应用，其特征在于，所述检测SAA1和SAA2基因拷贝数变异的试剂为SAA1特异性引物、SAA2特异性引物及内参引物，所述SAA1特异性引物的引物序列如下：

上游引物：5’-3’ TGGAGAAGTTAGAGGCTGCGGC；

下游引物：5’-3’ GGATGAAAACACTGGGCACCACC；

所述SAA2特异性引物的引物序列如下：

上游引物：5’-3’ CTGTGGTCCCTCCTCTTCTTGCC；

下游引物：5’-3’ GGAGTGAAAACACTGACCCTGCCT；

所述内参引物的引物序列如下：

上游引物：5’-3’ TCAGGCCCATGGGGCTCATT；

下游引物：5’-3’ GGGTCTGGAGAGGCCGACTTG。

2.一种非疾病诊断目的的测定SAA的基因拷贝数变异的实时荧光定量PCR分析方法，其特征在于，

在10μL微量PCR反应孔内加入以下试剂：

2X PCR Master Mix 5μL

模板基因组DNA 0.1~50ng

上下游引物至终浓度 0.1~4.00μM

热启动Taq聚合酶 0.2~1.0U

SYBR Green至终浓度 0.4x~1x

加入去离子灭菌水至终体积10uL；

其中，所述引物包括SAA1特异性引物，SAA2特异性引物，内参引物，

所述SAA1特异性引物为，

上游引物：5’-3’ TGGAGAAGTTAGAGGCTGCGGC；

下游引物：5’-3’ GGATGAAAACACTGGGCACCACC；

所述SAA2特异性引物为，

上游引物：5’-3’ CTGTGGTCCCTCCTCTTCTTGCC；

下游引物：5’-3’ GGAGTGAAAACACTGACCCTGCCT；

所述内参引物为，

上游引物：5’-3’ TCAGGCCCATGGGGCTCATT；

下游引物：5’-3’ GGGTCTGGAGAGGCCGACTTG；

所述实时荧光定量PCR的反应条件为：

第一阶段：95℃ 10分钟，1个循环；第二阶段：95℃15秒，65℃45秒，40个循环，其中65℃收集荧光；第三阶段：60℃1分钟，95℃10秒，1个循环，该阶段收集融解曲线；第四阶段：40℃10秒，1个循环；

扩增结果的循环数按照以下公式进行相对定量计算，即可分别得到SAA1及SAA2在待测样本中的拷贝数：

Copies=36/2^(C_T^SAA1/SAA2-C_T^Ref)

Copies: 拷贝数

C_T^SAA1/SAA2：SAA1或SAA2的扩增循环数

C_T^Ref：相应内参基因的扩增循环数。