[发明专利]带安全开关的嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用

说明书

本发明涉及一种带安全开关的嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用。该嵌合抗原受体包括依次连接的第一信号肽、c‑Met单链抗体、CD8结构域、41BB胞内结构域、DAP12‑ITAM结构域、T2A、第二信号肽以及改造的EGFRt。实验结果表明，上述嵌合抗原受体修饰的NK细胞，嵌合抗原受体免疫反应可控，安全性能好，治疗副作用少，特异性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种带安全开关的嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用。

背景技术

人间质表皮转化因子c-Met(Mesenchymal Epithelial Transition Factor，c-Met)是肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor，HGF)的受体，属于酪氨酸激酶受体超家族成员。c-Met通过与HGF结合，激活HGF/c-Met信号通路，降低细胞间的黏附力，有利于肿瘤细胞的转移。近年来研究发现，c-Met在我国发病率较高的肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、脑胶质瘤等肿瘤组织中呈现异常高表达、突变或活性改变。因此，c-Met已经成为抗肿瘤治疗的一个重要靶点。

近年来过继性细胞治疗技术中，嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞(CAR-T)技术在治疗肿瘤的临床应用中取得了显著的突破，在临床试验中表现出良好的靶向性、杀伤性和持久性，展示了巨大的应用潜力和发展前景。但是，传统的嵌合抗原受体修饰的T细胞，不能根据需要启动或停止发挥免疫作用，治疗副作用多、特异性差。最新的临床实验中发现CAR-T技术具有引起细胞因子风暴及系统性神经毒性等高风险因素。

自然杀伤细胞(Natural Killer Cell，NK细胞)是人体先天免疫的核心组成部分，是与T、B细胞并列的第三类群淋巴细胞，来源于造血干细胞，在骨髓内发育成熟。NK细胞具有很多特点：固有免疫细胞、非特异性直接杀伤靶细胞、不需要预先由抗原致敏、不需要抗体参与、无MHC限制性、发挥免疫杀伤作用早。因此，运用嵌合抗原受体修饰的NK细胞已经成为新的抗肿瘤研究方向。

然而，传统的嵌合抗原受体修饰的NK细胞存在安全性能较差、治疗副作用多、特异性差等问题。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够修饰的NK细胞，且使得修饰后的NK细胞的安全性能好、治疗副作用少、特异性高的带安全开关的嵌合抗原受体及其表达基因。

此外，还提供一种表达载体以及一种安全性能较好、治疗副作用少、特异性高的带安全开关的嵌合抗原受体修饰的NK细胞及其应用。

一种带安全开关的嵌合抗原受体，包括依次连接的第一信号肽、c-Met单链抗体、CD8结构域、41BB胞内结构域、DAP12-ITAM结构域、T2A、第二信号肽以及改造的EGFRt；其中，所述c-Met单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述改造的EGFRt的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

在一个实施方式中，编码所述c-Met单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

在一个实施方式中，编码所述改造的EGFRt的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

在一个实施方式中，所述嵌合抗原受体为：

(a)由SEQ ID No.5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或，

(b)在SEQ ID No.5所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述嵌合抗原受体活性的由(a)衍生的蛋白质。

在一个实施方式中，所述嵌合抗原受体为：

(a)由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列编码得到的蛋白质；或，