[发明专利]肺炎支原体重组抗原及其应用

说明书

本发明涉及一种肺炎支原体重组抗原及其应用，上述肺炎支原体重组抗原包括依次连接的P1A片段、第一连接肽、P1B片段、第二连接肽以及P30片段。实验结果表明，该重组抗原经过不同的方式纯化后能够获得不同类型的抗原优势表位，且各类型的抗原优势表位表现稳定，即能够根据需要稳定的表现出不同类型的抗原优势表位。能够大大减少检测时抗原的配对筛选工作，检测肺炎支原体时检出率高、特异性较高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种肺炎支原体重组抗原及其应用。

背景技术

肺炎支原体(MycoplasmaPneumoniac，Mp)是一种病原性支原体，由它引起的原发性非典型肺炎约占非细菌性肺炎的1/2，且近年来Mp感染的发病率呈上升趋势。除原发性非典型肺炎之外，Mp尚能引起其它呼吸道感染性疾病如支气管炎、咽炎等，以及神经系统、血液系统、心血管系统以及皮肤、肌肉、关节等并发症。普通人群中约30％的肺炎是由肺炎支原体引起的，Mp感染引起的呼吸道损害及各种肺外并发症已引起广泛关注。

肺炎支原体的诊断方法主要依靠分离培养和血清学试验。标本可采可疑病人的痰或咽试子，接种于含血清或酵母浸膏的琼脂培养基中，5～10天后观察有无直径30～100μm的圆形房顶样菌落。多次传代后可变为典型的“荷包蛋”样菌落，并能吸附多种动物红细胞和气管上皮细胞、HeLa细胞等，且此类吸附可被特异性抗体所抑制。分离的支原体经形态、溶血与生化反应作初步鉴定后需进一步用特异性抗血清作生长抑制试验和代谢抑制试验。用患者血清与支原体脂质抗原作补体结合试验，恢复期较急性期效价高4倍以上具有诊断价值。亦可用间接免疫荧光试验、间接血凝ELISA检测标本。

肺炎支原体抗体分为IgG抗体和IgM抗体两种，人类感染Mp后，因为肺炎支原体感染的潜伏期为2周～3周，大约7～10天出现IgM抗体，20天左右出现IgG抗体。当患者出现症状而就诊时，IgM抗体已达到相当高的水平，因此，IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标。但如IgM抗体阴性，也不能否定肺炎支原体感染，还需检测IgG抗体。IgG较IgM出现晚，需动态观察，如显著升高提示近期感染，显著降低说明处于感染后期。但是，检测到Mp特异性IgM并不能表明患者处于急性感染期，因为在感染后一年内，特异性IgM仍能持续升高。此外，大约20％的成年人再次感染Mp后，其特异性IgM抗体滴度很低，有时几乎检测不到。因此，在Mp的血清学诊断方法中，若能在检测中检测总抗体，则可较好地辅助Mp的临床诊断。

目前我国Mp发病率在持续上升，然而目前临床血清学检测很大部分是使用了Mp天然抗原，但是天然抗原价格昂贵，且提取天然抗原时步骤繁琐、无确定产量、且对人体危险性高，所以需要研究重组抗原为基础性的Mp生物学研究和研发快捷、准确的Mp检测试剂盒奠定基础。

然而传统的具有多个抗原表位的肺炎支原体重组抗原，很难根据需要稳定的表现出不同类型的抗原优势表位。抗原的配对筛选工作繁琐，用于检测肺炎支原体时检出率低、特异性较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种具有多个抗原表位，且能够根据需要稳定的表现出不同类型的抗原优势表位的肺炎支原体重组抗原及其应用。

一种肺炎支原体重组抗原，包括依次连接的P1A片段、第一连接肽、P1B片段、第二连接肽以及P30片段，所述P1A片段位于所述重组抗原的N端，所述P30片段位于所述重组抗原的C端，所述P1A片段为肺炎支原体粘附蛋白P1的第1219位氨基酸～第1422位氨基酸，所述P1B片段为肺炎支原体粘附蛋白P1的第1583位氨基酸～第1627位氨基酸，所述P30片段为肺炎支原体粘附蛋白P30的第168位氨基酸～第274位氨基酸。

在一个实施方式中，所述重组抗原为：

(a)由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或，

(b)在SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述重组抗原活性的由(a)衍生的蛋白质。