[发明专利]肿瘤化的人脐静脉内皮细胞疫苗及其在抗癌中的应用

说明书

本发明属于肿瘤预防技术方法领域，具体涉及一种由肿瘤微环境诱导的肿瘤化的人脐静脉内皮细胞疫苗及其在抗结肠癌肿瘤血管生成中的应用的专利申请。所述疫苗制备时包括：收CT26细胞的上清、CT26细胞上清诱导HUVEC细胞、收集、戊二醛固定等步骤。本申请将肿瘤血管内皮细胞作为肿瘤免疫治疗中的靶点，属于主动免疫治疗中的一种。本申请通过体外模拟肿瘤微环境，诱导制备了肿瘤化的HUVEC疫苗。初步实验结果表明，所制备的肿瘤化HUVEC疫苗，能够产生更有效的抑制肿瘤血管生成的作用，进而发挥抗结肠癌肿瘤生长的作用，表现出了较好的应用效果，同时也为基于抗肿瘤血管生成治疗方法的应用提供了新的可能。

技术领域

本发明属于肿瘤预防技术方法领域，具体涉及一种由肿瘤微环境诱导的肿瘤化的人脐静脉内皮细胞疫苗及其在抗结肠癌肿瘤血管生成中的应用的专利申请。

背景技术

结肠癌是世界范围内第二大导致死亡的癌症，每年有超过120万名新诊断的病人和每年有60多万人死于该病。在中国，它的发病率和死亡率分别排在第三位和第五位。针对该疾病的常规治疗方法中，主要包括根治性的手术方法和辅助性治疗方法，如常用的化疗和放射治疗已被广泛应用于结肠癌的治疗中。但总体而言，结肠癌的5年生存率仍然较低，因此迫切需要制定新的策略来治疗结肠癌。新的治疗策略中，肿瘤免疫治疗方法主要通过激发和增强机体免疫功能，进而达到控制和杀灭肿瘤细胞的目的，近年得到了较快发展，被认为是继手术、化疗、放疗以后的第四种肿瘤治疗模式。

已有研究认为，肿瘤的生长和转移依赖新生血管的生成，因此通过抗新生血管生成来抑制肿瘤进展成为目前研究的热点之一。过去几年的临床试验表明，血管靶向药物抗肿瘤能带来一定的临床获益，然而由于血管生成方式的多样性，参与信号通路的复杂性，致使针对单一靶点或单药治疗效果较差，并且面临原发或继发耐药的问题。另一方面，肿瘤血管生成的复杂机制对其生物标志物的筛选也造成一定困难。因此，需要迫切找到新的更有效的抗血管生成疗法。

近年来的部分研究表明，以血管相关抗原为靶点的疫苗可以引发机体产生特异性细胞或体液免疫反应，进而抑制血管生成，从而起到阻止肿瘤细胞生长和转移的作用，因此针对肿瘤血管生成的疫苗治疗已成为国内外研究的热点。其中，以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)作为抗原制备的全细胞疫苗得到了较多研究。但相关临床实验研究发现，该疫苗在治疗性免疫中虽然能够引起一定程度的免疫应答，但相关效果仍然较为有限，因此需要对相关治疗方案进行进一步的优化。

发明内容

本申请目的在于提供一种肿瘤化的HUVEC（人脐静脉内皮细胞，human umbilicalvein endothelial cell，HUVEC）疫苗及其制备方法，所制备的HUVEC疫苗高表达肿瘤血管内皮细胞Markers，同时具有较好特异性，从而可以在肿瘤血管内皮细胞杀伤方面表现出较好的应用效果，进而为抗肿瘤血管生成的免疫治疗奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一种肿瘤化的人脐静脉内皮细胞疫苗（HUVEC疫苗），通过如下步骤制备获得：

（1）收CT26细胞的上清，

对CT26细胞进行常规培养，在CT26细胞长到占据培养容器80%左右面积时，将培养基更换为含10% 体积分数G16血清的1640培养基（不加双抗），培养24h后，3000r/min离心5min，收集上清，弃去沉淀，-20℃保存备用；

（2）制备肿瘤化的HUVEC疫苗，

用条件培养基对HUVEC进行培养，制备肿瘤化的HUVEC疫苗；

所述条件培养基为：60%体积比的CT26细胞上清（即步骤（1）所制备）+40%体积比的ECM培养基(培养基内含2%体积份数FBS，不含因子和双抗)；

具体培养方法为：