[发明专利]一种定量检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种定量检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，其特征在于，包括：心型脂肪酸结合蛋白校准品、偶联有抗生物素抗体的磁微粒、吖啶类衍生物标记的心型脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体、生物素标记心型脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体、化学发光底物和质控品。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征在于，所述磁性微粒粒径2.5～3μm，所述磁微粒的活性基团为氨基或羧基，所述磁微粒的使用浓度为10mg/mL。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述吖啶类衍生物标记物为吖啶酯、吖啶酮类化合物、吖啶磺酰胺类化合物、吖啶基氨基乙酸或磺酸丙基吖啶酸-NHS酯。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲液，用于稀释生物素化抗体、吖啶类衍生物标记的抗体、偶联有抗生物素抗体的磁微粒，所述缓冲液包括：0.01-0.1M 4-羟乙基哌嗪乙磺酸， 150mM NaCl，质量比0.1%-1%的牛血清白蛋白，质量比0.1%-5% 海藻糖，质量比0.5%-1% 酪蛋白钠盐，兔免疫球蛋白G 5mg/mL，羊免疫球蛋白G3mg/mL，鼠免疫球蛋白G 1 mg/mL ，体积比0.2%的生物防腐剂ProClin 300；所述缓冲液的pH值为7.2。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述鼠免疫球蛋白G为鼠免疫球蛋白G₃。

6.一种定量检测心型脂肪酸结合蛋白的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

（1）以心型脂肪酸结合蛋白纯品原料配制校准品 ；

（2）制备吖啶类衍生物标记的抗体；

（3）制备生物素化抗体；

（4）以抗生物素抗体偶联磁微粒 ；

（5）分装上述校准品、标记物混合液和化学发光底物；

（6）组装为成品。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述以抗生物素抗体偶联磁微粒，包括：

（1）取100mL 0.05mol/L 2-吗啉乙磺酸溶液，依次加入 10 mg 磁性微粒和0.5 mg抗生物素抗体;

（2）加入10mg/mL 碳二亚盐酸盐溶液4μL ，反应2小时，在磁场作用下移去上清液;

（3）加入0.01M pH 7.2的磷酸盐缓冲液 10 mL，混匀，移去上清液;

（4）使用0.01M pH 7.2的磷酸盐缓冲液重复洗涤3次，稀释至0.75mg/mL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述制备吖啶类衍生物标记的抗体包括：

（1）称取心型脂肪酸结合蛋白单抗适量，使用0.05mol/L pH 9.5碳酸盐缓冲液调正至1mg/mL；

（2）吖啶类衍生物与抗体按照1:15摩尔计算，溶于二甲基甲酰胺，将两者混合，室温继续反应30分钟；

（3）反应液移至截留分子量8000～12000的透析袋，使用0.01M pH 7.2的磷酸盐缓冲液透析24小时;

（4）加入等体积甘油和体积比0.1%的生物防腐剂ProClin 300；

所述制备生物素化抗体包括：

（1）加入摩尔比15倍已活化的长链磺化生物素，2～8℃ 反应2小时 ，再转入室温继续反应30分钟;

（2）取适量抗-心型脂肪酸结合蛋白单抗，0.01M pH 7.2的磷酸盐缓冲液透析纯化；

（3）加入摩尔比15倍已活化的长链磺化生物素，2～8℃ 反应2小时 ，再转入室温继续反应30分钟 ；

（4）反应液移至截留分子量8000～12000的透析袋，使用0.01M pH 7.2的磷酸盐缓冲液透析24小时；

（5）加入等体积甘油和体积比0.1%的生物防腐剂ProClin 300。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于生物素化抗体浓度为0.18μg/ mL。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于吖啶脂标记单抗的工作浓度大于0.41μg/mL。