[发明专利]一种阳性脂质体DOTAP的制备方法

说明书

本发明公开了一种阳性脂质体DOTAP的制备方法，包括(±)‑DOTAP,(S)‑DOTAP,(R)‑DOTAP的制备方法。本发明采用廉价的3‑氯‑1,2‑丙二醇为起始物，通过两步法合成DOTAP产品，经硅胶柱纯化可获得高纯度的阳性脂质体DOTAP。本发明提供了一种成本低廉且工序简单的DOTAP制备方法，该方法涉及的原料成本低，反应条件温和，同时后处理简单，无需离子交换工序，具有经济、环保、高效性。

技术领域

本发明属于药物合成领域，具体涉及一种阳性脂质体DOTAP的制备方法。

背景技术

阳性脂质体作为一种高效的基因传递载体，通过将核酸特异性地传递到靶细胞中，达到将外源基因导入真核细胞的目的，其基因转染率高，离体细胞可以瞬间表达外源基因，在基因治疗方面有广泛而独特的应用。DOTAP是一种常用的阳离子脂质体,全称为2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵，具有生物惰性，可生物降解，无毒，无免疫原性，它与核酸能形成稳定的转染复合物进入细胞，并将核酸释放到细胞内，而自身不会对机体造成损伤，因此常被用作真核细胞转染剂和DNA疫苗的载体。CN105920599A报道阳性脂质体DOTAP是一种良好的佐剂，与蛋白质抗原形成一种胶束膜疫苗，既可诱导体液免疫应答，又可诱导细胞免疫应答。CN102133404A报道阳性脂质体DOTAP可用作肿瘤靶向治疗药物的载体，DOTAP可与卵磷脂组成一种新型脂质体，这种新型质体与生物活性物质形成稳定的复合物，从而将活性物质定向、高效地携带到人体内部的靶细胞内，达到输送药物的目的。然而，目前阳性脂质体DOTAP的制备方法成本高昂，制备工艺复杂，反应时间长，安全隐患高。

US5264618报道了一种制备DOTAP消旋体的方法，该方法是通过氯甲烷对二甲基氨基化合物进行甲基化反应制备，反应条件为30℃，恒定绝对压力为1200mbar，反应137小时。该方法所用的氯甲烷为易燃、易爆气体，且需要高压密封，反应长达5.7天。此反应条件苛刻，设备要求高，反应时间长，安全隐患高且环境不友好。

DE4013632A1中概述了DOTAP的一种合成方法，该方法是在氯仿/甲醇/HCl水溶剂系统中进行DOTAP溴化物的离子交换，然后借助色谱柱纯化。DOTAP溴化物是预先从1-溴-2,3-二油酰氧基丙烷制得。该方法的制备成本高昂且离子交换工序繁琐。

Leventis和Silvius在Biochim.Biophys.Acta中报道了DOTAP的一种合成方法，在两相溶剂/NaCl溶液系统中进行DOTAP碘化物的离子交换。DOTAP碘化物是通过碘甲烷甲基化相应的二甲氨基化合物而制得。该方法用到剧毒的碘甲烷气体且离子交换工序繁琐，环境不友好且制备成本高。

以上报道的合成方法反应条件苛刻，且用到大量易燃、易爆且剧毒的气体，反应操作及后处理工序繁琐，制备成本高昂。

发明内容

本发明目的在于：针对上述存在的问题，本发明提供了一种成本低廉且工序简单的DOTAP制备方法，该方法涉及的原料成本低，反应条件温和，同时后处理简单，无需离子交换工序，具有经济、环保、高效性。

本发明采用的技术方案如下：

一种阳性脂质体DOTAP的制备方法，以3-氯-1,2-丙二醇为基础物质，以三甲胺、油酸为中间反应物来合成DOTAP，所述3-氯-1,2-丙二醇中的氯可以用F，Br，I，HSO₄^-，H₂PO₄^-替代。具体包括以下步骤：

步骤一：制备2,3-二羟基丙基三甲基氯化铵：

将3-氯-1,2-丙二醇加入单口瓶中，再加入30％的三甲胺和溶剂，升温至20-100℃，保温搅拌6-20h至原料3-氯-12-丙二醇,反应完全。降温至20℃，用乙酸乙酯洗涤反应液3-5次，收集滤液并在60-70℃减压浓缩至干得类白色固体，即为2,3-二羟基丙基三甲基氯化铵。