[发明专利]一种矾根花序轴离体再生体系建立的方法

权利要求书

1.一种矾根花序轴离体再生体系建立的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

（1）外植体的选取与消毒：选取矾根花序轴作为外植体消毒处理；

（2）愈伤组织的诱导：取步骤（1）中处理得到的外植体小段，以斜面放置方式接种于诱导培养基中进行愈伤组织的诱导，培养温度为25±2℃，暗培养10d，然后进行光照培养25d；所述诱导培养基为MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.02mg/L，pH值为5.8-6.0；

（3）愈伤组织的分化：将步骤（2）中诱导得到的愈伤组织，诱导25d后，切下，接入分化培养基进行不定芽分化，培养温度为25±2℃；所述分化培养基为N6+CPPU 0.3mg/L+IBA0.01mg/L，pH值为5.8-6.0；

（4）不定芽的继代增殖：将步骤（3）得到的不定芽切割后，接入继代增殖培养基中进行继代培养25d，培养温度为25±2℃；所述继代增殖培养基为MS＋6-BA0.2mg/L，pH值为5.8-6.0；

（5）根的诱导：将步骤（4）中继代增殖得到的试管苗接入生根培养基中进行生根培养15d，培养温度为25±2℃；所述生根培养基为MS+2.0mg/L IBA，pH值为5.8-6.0；

(6) 将培养瓶的瓶盖打开，炼苗2-3天，将根浸泡在复合微生物制剂中15min后，然后移栽入扦插基质中；

所述复合微生物制剂为，短小芽孢杆菌发酵液：发根植物单胞菌发酵液：假丝酵母菌发酵液：产黄纤维单胞菌发酵液：草炭：磷酸氢二钠重量比＝3：4：4：3：1：2；

所述短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为ATCC No.700814；

所述发根植物单胞菌（Agrobacterium rhizogenes）为ATCC No.11325；

所述假丝酵母菌（Candida utilis）为ATCC No.22023；

所述产黄纤维单胞菌（cellulomonas flavigena）为ATCC No.482。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合微生物制剂的制备方法为：首先将短小芽孢杆菌：发根植物单胞菌：假丝酵母菌：产黄纤维单胞菌发分别按照常规方式活化，然后培养至菌液中活菌数达到10⁷个/克获得发酵液，将上述发酵液按照质量比例3：4：4：3混合，按照重量配比添加草炭、磷酸氢二钠即得。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒处理具体步骤为用清水冲洗干净，然后用洗涤剂漂洗一次，流水冲洗后，于无菌操作台上用75％乙醇消毒10-20s，立即倒入0.1％的升汞消毒12min，最后用无菌水洗涤并振荡，将消毒完毕的花序轴切割为2cm长的小段。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扦插基质为：按照2：2：1的体积比例将泥炭土、蛭石和珍珠岩混匀制备。