[发明专利]FGFR-Fc融合蛋白及siRNA

说明书

本发明提供了FGFR‑Fc融合蛋白和siRNA，用于抑制血管生成和抑制FGFR1蛋白的表达。该FGFR‑Fc融合蛋白和siRNA可用于制备抑制血管生成和抑制FGFR1蛋白的表达的药物。

技术领域

本发明属于蛋白质和基因工程领域，具体而言，本发明涉及FGFR-Fc融合蛋白，其可用于抑制血管生成，另外本发明涉及siRNA，其可用于抑制FGFR1蛋白的表达。

背景技术

中国专利申请第201110303377.0号公开了特异性bFGF结合肽，其具有结合bFGF的能力而同时没有与aFGF和FGF21的结合活性，其中两种结合肽中，效果较差的一种一直没有得到重视。

然而，本发明人发现，该肽的效果还是很不错的，尤其是在抑制血管生成方面。另外，本发明还在研究中令人意外地发现了一种siRNA，其可用于抑制FGFR1蛋白的表达。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供了新的FGFR-Fc融合蛋白和siRNA，用于抑制血管生成和抑制FGFR1蛋白的表达。另外，本发明还提供了该FGFR-Fc融合蛋白和siRNA的编码核酸、载体、细胞、制备方法以及应用等。

在第一个方面，本发明提供了用于抑制血管生成的FGFR-Fc融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

在第二个方面，本发明提供了编码本发明第一个方面所述的FGFR-Fc融合蛋白的核酸。本发明的核酸，可以是DNA形式，也可以是RNA形式，优选DNA形式。DNA形式包括重组的DNA和人工合成的cDNA，DNA可以是编码链或模板链。通过常规技术，如PCR方法、DNA重组技术或人工合成的方法，本领域技术人员可以很容易获得本发明的编码融合蛋白的核苷酸序列或其片段。事实上，根据设计的多核苷酸序列，当前已经能够通过商业渠道规范地制备出相应的DNA。一旦获得核酸，就可以将其克隆入载体，再转化或转染入相应的细胞，然后通过常规的宿主细胞进行增殖，从中分离得到大量的核苷酸序列。在本发明的具体实施方式中，本发明的核酸的多核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

在第三个方面，本发明提供了载体，其含有本发明第二个方面所述的核酸。本文中的术语“重组表达载体”、“表达载体”，有时仅称“载体”，在此可以交互替换使用，是指本领域中常用的细菌质粒、粘粒、噬菌粒、酵母质粒、植物细胞病毒、动物病毒及其它各种病毒载体。本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达用的载体(原核表达载体)、在酵母中表达用的载体(如毕赤酵母载体、汉逊酵母载体等)、在昆虫细胞中表达的杆状病毒载体、在哺乳动物细胞中表达用的载体(痘苗病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺伴病毒载体等)、在植物中表达用的植物病毒载体以及在哺乳动物乳腺中表达用的各种载体。优选表达载体包含选择标记基因，如细菌的氨苄青霉素抗性基因、四环素抗性基因、卡那霉素抗性基因、链霉素抗性基因、氯霉素抗性基因；酵母菌的新霉素抗性基因、Zeocin抗性基因，酵母菌的缺陷选择标志，如His，Leu，Trp等；真核细胞的新霉素抗性基因、Zeocin抗性基因、二氢叶酸还原酶基因及荧光蛋白标记基因等。在本发明的具体实施方式中，本发明的载体是pN24，其适合在哺乳动物细胞中表达。

在第四个方面，本发明提供了细胞，其特征在于，所述细胞含有本发明第三个方面所述的载体，或者所述细胞转化或转染有本发明第二个方面所述的核酸。本发明的细胞可以是原核细胞，也可以是真核细胞，如，细菌细胞、酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。本领域技术人员熟知如何将载体高效地转化或转染入宿主细胞中，所用方法包括但不限于：氯化钙法、电穿孔法用于细菌细胞，电穿孔法、原生质体融合法、脂质体包裹、磷酸钙共沉淀、电融合法以及显微注射法。令人惊讶的是，本发明人从当前天文数字般的宿主细胞中发现了鼠骨髓瘤细胞能够分泌表达转染入其中的本发明的bFGF结合剂，由此无需破碎细胞即可利用相对杂质成分较少的培养上清液直接进行纯化。因此，本发明优选所述细胞是转化或转染有本发明第二个方面所述的核酸的鼠骨髓瘤细胞，尤其是NS0细胞。