[发明专利]一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光PCR引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR引物、检测试剂盒及方法。本发明分别设计了4对特异性PCR引物和4条用不同荧光基团标记编码的荧光探针，在一个反应中同时对肉毒杆菌A/B/E/F型进行快速、准确分型的四重荧光定量PCR检测试剂盒。本发明的各通道检测荧光信号及扩增效率互不干扰，而且检测灵敏度和特异性高，临床上具有极高的应用价值。

技术领域

本发明属于食源性病原菌检测领域，关于一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光PCR检测试剂盒及其方法。

背景技术

肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，是毒性最强的细菌之一。它在繁殖过程中分泌肉毒毒素，该毒素是目前已知的最强剧毒物，可抑制神经末梢释放乙酰胆碱，导致肌肉松弛型麻痹。以前有的军队将这种毒素用于制作生化武器。人们食入或者吸收这种毒素后，神经系统将遭到破坏，出现眼睑下垂、复视、斜视、吞咽困难、头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状，严重者可因呼吸麻痹而死亡。而肉毒杆菌在自然界分布广泛，土壤中常可检出，偶亦存在于动物粪便中。根据所产生毒素的抗原性不同，肉毒杆菌分为A、B、Ca、Cb、D、E、F、G这8个型，能引起人类疾病的有A、B、E、F型，其中以A、B型最为常见。

肉毒杆菌给人类生活带来如此严重的影响，建立一种能够检测肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的试剂为目前所需。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR引物和探针。

本发明的另一目的在于提供一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR检测试剂盒。

本发明的再一目的在于提供一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR的检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR的引物组，引物组的核苷酸序列如下所示：

肉毒A型引物：

BT-AF1：5'-TTGAGGAGTCACTTGAAGTTG-3'，

BT-AR1：5'-TGCTAATGTTACTGCTGGATCTG-3'；

肉毒B型引物：

BT-BF1：5'-TTGGGTGAAAAGTTATTAGAGATG-3'，

BT-BR1：5'-ACAGTTACACTAGCAATGTTTGTG-3'；

肉毒E型引物：

BT-EF1：5'-GAAAAATATTTGGATAATTCCAG-3'，

BT-ER1：5'-AGGGTCATAATAACTACTATCTCCAT-3'；

肉毒F型引物：

BT-FF1：5'-GTAATCCTGCAGGGGAAGTTT-3'，

BT-FR1：5'-TTGTAGTTCTAGTAACTGGATGGAA-3'。

一种肉毒杆菌A/B/E/F型快速分型的四重荧光定量PCR的荧光探针，探针核苷酸序列如下所示：

肉毒A型探针：

BT-AP1：5'-CCTCTTTTAGGTGCAGGCAAATTTGCT-3'；

肉毒B型探针：

BT-BP1：5'-TTCGAGTGGAACACGTCTATCTCCAAGAT-3'；