[发明专利]一种带有绿色荧光蛋白标签的非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGH19-EGFP及应用在审
| 申请号： | 201810109496.4 | 申请日： | 2018-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN110117612A | 公开（公告）日： | 2019-08-13 |
| 发明（设计）人： | 赵春青;盛成旺;贾忠强;黄秋堂;韩召军;刘泽文 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66;G01N33/68;C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 杜静;徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非洲爪蟾卵母细胞表达 绿色荧光蛋白 标签 检测 增强型绿色荧光蛋白 分子生物学手段 共聚焦显微镜 绿色荧光标签 功能性分析 荧光显微镜 靶标蛋白 表达模式 蛋白表达 经济成本 目的蛋白 目的基因 时空动态 实时观察 实验流程 靶蛋白 通用型 抗体 可用 质粒 应用 蛋白 直观 改造 开发 | ||
1.一种带有绿色荧光蛋白标签的非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGH19-EGFP，其特征在于该载体为带有修饰序列的EGFP基因连接到pGH19质粒上获得；所述带有修饰序列的EGFP基因为EGFP基因5’端加入限制性内切酶A的识别碱基序列和一段人工设计的酶切位点碱基序列，及3’端自身携带的限制性内切酶B的识别碱基序列。
2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述人工设计的酶切位点碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述限制性内切酶A为EcoR I限制性内切酶、Xma I限制性内切酶、Sma I限制性内切酶、BamH I限制性内切酶、BstB I限制性内切酶、Xho I限制性内切酶或EcoR V限制性内切酶。
4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述限制性内切酶A的碱基识别序列选自SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9。
5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述限制性内切酶B为Xba I限制性内切酶、BsrG I限制性内切酶、PspOM I限制性内切酶、Apa I限制性内切酶、BmgB I限制性内切酶或BstP I限制性内切酶。
6.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于所述限制性内切酶B的碱基识别序列选自SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14或SEQ IDNO.15。
7.一种带有绿色荧光标签的非洲爪蟾卵母细胞表达载体pGH19-EGFP，其特征在于该载体的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
8.一种权利要求1～7任一项表达载体中插入目的基因形成的基因表达载体。
9.权利要求1～7任一项表达载体或权利要求8所述基因表达载体在生物检测中的应用。
10.权利要求1～7任一项表达载体或权利要求8所述基因表达载体在实时观察蛋白表达动态或蛋白纯化或检测中的应用。
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