[发明专利]双模拟酶信号放大的多鸡细胞因子化学发光免疫分析方法

权利要求书

1.一种用于非诊断目的的双模拟酶信号放大的多组分 鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于：通过将含多个G-四链体序列的信号DNA修饰在羧化CuSNPs上，与氯化血红素反应形成CuSNPs/hemin-G-四链体DNA酶后，再固定二级抗体Ab2，取得CuSNPs@DNAzyme-Ab2双模拟酶信号放大探针，将所述探针用于多组分鸡细胞因子的化学发光成像免疫分析检测。

2.根据要求1所述的一种用于非诊断目的的多组分鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于以下步骤：

1）采用丝网印刷方法，通过模板在环氧基功能化载波片表面印刷由多个免疫微孔组成的免疫微孔阵列；将各种鸡细胞因子捕获抗体分别与分别壳聚糖溶液混合后滴入所述免疫微孔阵列的免疫微孔中，室温反应后，置于4℃环境中晾干；将牛血清蛋白封闭缓冲液滴入各免疫微孔中，在4℃下密封封闭，而后用磷酸盐缓冲溶液冲洗并在氮气氛围下吹干，得多组分鸡细胞因子化学发光免疫阵列传感器；

2）将多种鸡细胞因子抗原样品滴入相对应的免疫阵列微孔中，室温下第一步温育后，磷酸盐缓冲液冲洗并用氮气吹干后，滴入相应的CuSNPs@DNAzyme-Ab2双模拟酶信号放大探针并于室温下第二步温育，而后磷酸盐缓冲液冲洗并氮气吹干；

3）在每个免疫微孔中加入化学发光底物，通过电感耦合CCD同时检测并多种鸡细胞因子的化学发光光斑及信号值。

3.根据要求2所述的一种用于非诊断目的的多组分鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于：所述步骤1）中，用于混合的多种鸡细胞因子捕获抗体和壳聚糖溶液的浓度分别为200 μg/mL和0 .5～1 .5 wt%，混合体积比为1∶1。

4.根据要求2所述的一种用于非诊断目的的多组分鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于：所述步骤2）中，两步温育的时间均为25分钟。

5.根据要求2所述的一种用于非诊断目的的多组分鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于：所述步骤3）中，化学发光成像信号由Fluor . Chem . E化学发光成像仪捕捉并记录，以CCD照相机动态积分300s收集所产生的化学发光信号并显示成不同强度的光斑图。

6.根据要求1或2或3或4或5所述的一种用于非诊断目的的多组分鸡细胞因子化学发光免疫分析方法，其特征在于：将24μL、100μM包含多个G-四链体系列的信号DNA与1mL、5mg/mL羧化硫化铜纳米粒子混合后，再加入过量氯化血红素，经反应得到多层CuSNPs/hemin/G-四链体DNA酶，然后再加入20μL、100μg/mL多种鸡细胞因子二级抗体Ab2，即制备取得多种CuSNPs@DNAzyme-Ab2双模拟酶信号放大探针。