[发明专利]百合脱毒用的盐酸金刚乙胺制剂

说明书

本发明公开了一种百合脱毒用的盐酸金刚乙胺制剂，成分及其浓度为：盐酸金刚乙胺0.2~0.6g/L、DHT0.1~0.3 g/L、琥珀酸酐0.4~0.8mg/L、艾叶提取物2~5 g/L和表面活性剂0.2~0.4 g/L。并且还提供了一种基于上述制剂的百合脱毒方法，将热处理和化学处理相结合，提高病毒钝化率，脱毒率达到百分百。本发明制备的盐酸金刚乙胺制剂不仅对外植体无损害，还能在一定程度上缩短启动时间，利于愈伤组织迅速生长，使得分化出的愈伤组织块大，颜色较绿。二次茎尖脱毒后得到的组培苗进行多次继代培养后进行病毒检测，未检测到病毒，说明本发明的百合脱毒方法效果好，脱毒率达百分之百。

技术领域

本发明涉及百合培养技术领域，具体是一种百合脱毒用的盐酸金刚乙胺制剂。

背景技术

百合是多年生球根花卉，种类和品系均多，花期长，花朵硕大，色彩丰富，花姿优美。既能作切花、盆花，又能在园林中与乔、灌、草配置，可取得很好的景观效果。全世界百合属(Lilium)植物共有l15种，其中原产中国的有55个种18个变种，占世界百合属植物的一半。

近年来随着百合生产规模的扩大，种球几代自繁和快速流通使得百合病毒病累积日趋严重，影响了百合的经济价值及花、叶的观赏价值。在已报道的十余种侵染百合的病毒中，发生最为普遍，危害最为严重的病毒有3种：黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)、百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)和百合斑驳病毒(Lilymottlevirus,LMoV)，它们常表现为复合侵染，造成植株的茎、叶或花出现斑驳或畸形，严重的导致植株矮小、退化甚至死亡，而且随着病毒的传播，常导致百合大面积感病，严重影响了百合鲜切花的产量和品质。这些病毒主要通过蚜虫等昆虫介体传播，传播速度快，且难以用化学药剂或生物制剂进行直接有效防治。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种可有效阻碍病毒蛋白合成，脱毒率达百分之百，并且对外植体无损害，甚至有促进愈伤组织生长作用的合脱毒用的盐酸金刚乙胺制剂。

本发明的目的之二在于提供一种将热处理和化学处理结合，脱毒率达到百分百的基于盐酸金刚乙胺制剂的百合脱毒方法。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：百合脱毒用的盐酸金刚乙胺制剂，成分及其浓度为：盐酸金刚乙胺0.2~0.6g/L、DHT0.1~0.3 g/L、琥珀酸酐0.4~0.8mg/L、艾叶提取物2~5 g/L和表面活性剂0.2~0.4 g/L。现有技术中化学药剂脱除病毒主要是利用孔雀绿、硫脲嘧啶、8-氮鸟嘌呤、病毒唑等抗病毒药剂来抑制病毒合成，达到脱除病毒的目的。试验表明，使用上述药剂对进行百合脱毒，多次继代培养后，百合仍会表现出茎、叶或花出现斑驳或畸形等现象，脱毒效果并不理想，对寄主有害。本发明将用于预防（成人和儿童）和治疗（成人）A型流感病毒感染的盐酸金刚乙胺，和琥珀酸酐、DHT和艾叶提取物协同作用，用于百合脱毒，通过使病毒粒子的蛋白凝聚和蛋白合成受阻，从而使病毒蛋白合成受阻。至于关于病毒不能复制的原因，可能是病毒RNA失去了mRNA的功能，从而不能合成病毒复制所需要的早期蛋白，也可能是其他原因。本发明盐酸对金刚乙胺制剂对百合病毒的抑制作用机理仅限于初步了解，其真正的作用机理还需要进行深入细致的研究。此外，制备的盐酸金刚乙胺制剂不仅对外植体无损害，还能在一定程度上缩短启动时间，利于愈伤组织迅速生长，使得分化出的愈伤组织块大，颜色较绿。

表面活性剂包括吐温-20或吐温-80或司盘-20或司盘-80。表面活性剂可加快盐酸金刚乙胺制剂中的活性成分进入百合细胞的速度，提高脱毒效率，上述列举的4种表面活性剂的作用效果尤为突出，为表面活性剂种类的优选。

基于盐酸金刚乙胺制剂的百合脱毒方法，将百合小鳞茎进行日夜变温热处理，然后将其置于添加有2~4%盐酸金刚乙胺制剂的MS+BA0.5~1.0mg/L培养基中脱毒培养，剥离得到培养后的百合茎尖，重复上述脱毒培养，得到无毒百合组培苗。通过将热处理和化学处理（即在外植体培养时加入盐酸金刚乙胺制剂）结合，提高病毒钝化率，脱毒率达到百分百。