[发明专利]病原真菌单孢分离装置

说明书

本发明公开了一种病原真菌单孢分离装置，包括载玻片和网状机构，网状机构设在载玻片上；该网状机构由若干种不同颜色的金属丝编织构成。本发明具有以下优点：采用若干个多色方格设在载玻片上，大大提高了单孢存在的概率，可以保证有单个孢子在单个方格里，再按照方格边框颜色很快确定其位置，无需在显微镜下确定，就能快捷高效地把单孢挑取出来，减轻操作过程，缩短实验时间；另外盖玻片创造了一个封闭的孢子萌发的环境，这样可以省去其他密闭的培养装置，另一方面因为没有二次操作，不需要将培养基块放在载玻片上暴露在空气中的环节，也避免了观察时受杂菌污染的风险，对操作的要求大大降低。

技术领域

本发明涉及生化设备技术领域，尤其是一种病原真菌单孢分离装置。

背景技术

国内外真菌菌种的纯化在不断的改革和简化，截止到目前纯化菌种的方法：

1、直接挑单孢纯化法：待培养基上产孢后，在体视显微镜下观察目标菌和污染菌的产孢表型，将目标菌与污染菌区分开。然后用细的挑针在体视显微镜下挑出病原孢子。

2、稀释纯化法：将带杂菌的孢子悬浮液加适量的灭菌水，不断稀释到每一小滴悬浮液中大致只有一个孢子。由于几率的不同，有的小滴中可能没有孢子或有两个及以上，在显微镜下检查。将确实只有一个孢子的小滴孢子悬浮液移植到适当的培养基上培养。

3、琼脂平板表面单孢子挑取法：利用接种环将少量孢子悬浮液或干孢子，点或者划线和涂匀的办法加在琼脂平板表面上。如果孢子较大，可以直接将琼脂平板放在体视显微镜下，从琼脂平板正面检视，寻找目的病菌，如病菌周围没有杂菌孢子，就可以用接种环将带有小块单孢子的琼脂培养基切下，再用接种针移植到适宜的培养基上生长。如病菌孢子与杂菌孢子离得很近，可以先用尖挑针将病菌孢子拖到干净的地方再分离。另外也可以从培养皿的反面检查，用低倍镜反面检查，如发现在视野内只有一个孢子，同时附件也没有孢子存在，就用记号笔在培养基底部(孢子存在的位置)画一个小点作记号，用接种环将带有小块单孢子的琼脂培养基切下，再用接种针移植到适宜的培养基上生长。

4、邱小艳以玉米小斑病菌的单孢分离为例，并综合改进其他单孢分离方法，通过组织分离、孢悬液涂布、挑针转移三个步骤，挑取分散在清水琼脂平板上已经萌发的孢子获得单孢。这种方法通过将病斑进行分离培养，然后制成一定浓度的孢子悬液，制成悬液的时候震荡的力度不宜过大，以免菌丝跟着脱落，涂布过程要只取上清液，防止其他菌丝残体附着，然后培养一定时间再长出芽管的时候，切成小块在显微镜下镜检，这个过程因为暴露的时间太长，所以要绝对操作规范，尽量避免污染。

5、国外真菌单孢分离法用Keitt法。使用工具孢子割切器:针端有向下稍弯、上有直径约三毫米的金属小圈的孢子割切器；另一工具是针端有弯成约90度镰刀状的挑取孢子的小勺。培养基中倒入孢子液，显微镜下观察，选择单个孤立的孢子并做标记，用孢子割切器割取孢子，再用小勺挑取含有单孢子的小块，移植。

6、Lambert法设计了能安装在显微镜上的割切器，移动接物镜，使割切器正向着孢子，然后把镜管逐渐向下，切割单孢琼脂，此法割切器每次使用后需灭菌。

以上几种方法各有利弊，在解剖镜下操作的多适宜较大的真菌孢子，并且污染度较高；稀释法操作时不仅繁琐，更重要的是不能完全保证是单孢；琼脂平板挑取，在实际操作时存在解剖镜下污染问题及小孢子寻找困难问题，如使用低倍镜反面检查法，由于玻皿在镜下不能完全对焦，检视孢子时存在问题；国外技术手段较规范，但由于割切器在国内无法获得且机械操作不好掌握。因此，就单孢分离方法，寻找一个简单有效，简便易行的方法是植物病理学研究中急需解决的一个问题。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提出一种病原真菌单孢分离装置，结构简单，操作容易，不易出现污染，降低了对提单孢技术操作的要求。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种病原真菌单孢分离装置，包括载玻片和网状机构，网状机构设在载玻片上；该网状机构由若干种不同颜色的金属丝编织构成。