[发明专利]一种抗血清干扰TaqDNA聚合酶及其制备和应用有效
| 申请号： | 201810111837.1 | 申请日： | 2018-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN108070577B | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 危宏平;余军平;熊进;张晓旭 | 申请（专利权）人： | 中国科学院武汉病毒研究所 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血清 干扰 taqdna 聚合 及其 制备 应用 | ||
1.一种抗血清干扰的Taq DNA聚合酶，其特征在于，其蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.一种编码权利要求1所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。
3.一种制备权利要求1所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)克隆SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；
(2)将步骤(1)所得的核苷酸片段连接到基因表达载体中，构建重组质粒；
(3)将重组质粒转化到宿主细胞中，得到重组细胞；
(4)对步骤(3)中重组细胞进行诱导表达，收集菌体；
(5)裂解步骤(4)中菌体，过滤，收集裂解粗产物；
(6)利用镍柱亲和纯化所述裂解粗产物，得到所述的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。
4.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(2)中基因表达载体为pET-28a。
5.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)中宿主细胞为原核细胞。
6.根据权利要求5所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，所述步骤(3)中宿主细胞为大肠杆菌感受态细胞E.coliBL21。
7.根据权利要求6所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，步骤(4)中诱导表达方法为：将步骤(3)中重组细胞于5mL LB液体培养基中37℃、180rpm培养8-10h后，转接到500mL LB液体培养基中，37℃、180rpm培养，待OD600至0.4-0.6时，加入IPTG至终浓度为0.5mM，37℃180rpm诱导4h。
8.根据权利要求3所述的一种制备抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于，步骤(5)中是采用溶菌酶裂解菌体，所述溶菌酶的浓度为4mg/ml。
9.一种酶制剂，其特征在于，包括权利要求1的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶。
10.一种权利要求1的抗血清干扰的Taq DNA聚合酶的应用，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶应用于血清中的目的基因检测，所述目的基因检测是非诊断目的的检测。
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