[发明专利]多信号嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用

说明书

本发明涉及一种多信号嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用。该嵌合抗原受体包括第一片段、第二片段以及连接第一片段与第二片段的自裂解多肽T2A，第一片段包括依次连接的第一信号肽、TCRγ链以及TCRδ链，第二片段包括依次连接的第二信号肽SP、肿瘤抗体、CD8结构域、41BB胞内结构域及DAP12‑ITAM结构域，自裂解多肽T2A的C端与TCRδ链相连，自裂解多肽T2A的N端与第二信号肽SP相连。实验结果表明，上述多信号嵌合抗原受体能够在NK细胞中稳定表达，能够更为快速特异性的识别恶性肿瘤细胞并进行杀伤，降低治疗的毒副作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种多信号嵌合抗原受体及其表达基因、其修饰的NK细胞及应用。

背景技术

新陈代谢是机体生命活动的基本特征，包括物质代谢和与之相伴的能量代谢。有机体在物质代谢过程中能量的释放、转换和利用过程，称为能量代谢。恶性肿瘤的一个重要特征为肿瘤细胞的高代谢能力，肿瘤细胞高代谢可以特异性地过度产生肿瘤磷酸化抗原小分子。

近年来过继性细胞治疗技术中，嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞技术在治疗肿瘤的临床应用中取得了显著的突破，在临床试验中表现出良好的靶向性、杀伤性和持久性，展示了巨大的应用潜力和发展前景。但是，最新的临床实验中发现CAR-T技术具有引起细胞因子风暴及系统性神经毒性等高风险因素。

自然杀伤细胞(Natural Killer Cell，NK细胞)是人体先天免疫的核心组成部分，是与T、B细胞并列的第三类群淋巴细胞，来源于造血干细胞，在骨髓内发育成熟。在外周血中约占淋巴细胞总数的10％～15％，脾内约有3％～4％，也可出现在肺脏、肝脏和肠粘膜，但在胸腺、淋巴结和胸导管中罕见。与T细胞比较，NK细胞具有很多特点：固有免疫细胞、非特异性直接杀伤靶细胞、不需要预先由抗原致敏、不需要抗体参与、无MHC限制性、发挥免疫杀伤作用早。因此，研究人员希望通过嵌合抗原受体修饰的NK细胞用于治疗肿瘤。

然而，传统的嵌合抗原受体修饰的NK细胞存在识别过程不灵敏、治疗毒副作用多的问题。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够在NK细胞中稳定表达、识别肿瘤细胞过程灵敏、治疗毒副作用少的多信号嵌合抗原受体及其表达基因。

此外，还提供一种表达载体以及一种多信号嵌合抗原受体修饰的NK细胞及其应用。

一种多信号嵌合抗原受体，包括第一片段、第二片段以及连接所述第一片段与所述第二片段的自裂解多肽T2A，所述第一片段包括依次连接的第一信号肽、TCRγ链以及TCRδ链，所述第二片段包括依次连接的第二信号肽SP、肿瘤抗体、CD8结构域、41BB胞内结构域及DAP12-ITAM结构域，所述自裂解多肽T2A的C端与所述TCRδ链相连，所述自裂解多肽T2A的N端与所述第二信号肽SP相连。

在一个实施方式中，所述第一片段的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述第二片段的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

在一个实施方式中，编码所述第一片段的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，编码所述第二片段的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

在一个实施方式中，所述嵌合抗原受体为：

(a)由SEQ ID No.5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或，

(b)在SEQ ID No.5所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述嵌合抗原受体活性的由(a)衍生的蛋白质。

在一个实施方式中，所述嵌合抗原受体为：

(a)由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列编码得到的蛋白质；或，