[发明专利]一种辅助检测阿兹海默疾病的miRNA

权利要求书

1.一种辅助检测阿兹海默疾病的miRNA，其特征在于，所述miRNA为miRNA-563-5p，所述miRNA-563-5p在阿兹海默病患者血清中显著上调。

2.根据权利要求1所述的miRNA，其特征在于，其筛选过程包括：制作血清微小核糖核酸的生物芯片，该芯片包含了人血清中能正常检测到的全部微小核糖核酸的探针，芯片能高通量地筛选血清中稳定变化的微小核糖核酸探针，同时通过血清中微小核糖核酸的整体变化预测和诊断疾病，首先通过测序的方法确定血清中有一个以上拷贝的微小核糖核酸，然后合成这些微小核糖核酸的的反向互补探针，再把这些探针用芯片点样仪点制在一张100×100mm、经过化学修饰的载玻片上，点制在芯片上的样品还包括作为内标的U6、tRNA，人工制备的30个碱基长度的外标，阳性对照等，整个点阵分成8个亚阵，每个亚阵有20行，20列，点间距为200μm，点的直径约为120μm，每条探针重复三次，芯片操作流程为：(1) 对于阿兹海默病患者，样品来自27名中期至晚期阿兹海默病患者的血清，同时以5名65岁健康老人的血清作对照，分别提取样品的血清总RNA，甲醛变性胶电泳检测总RNA的质量；(2)微小核糖核酸的分离：取50-100μg总RNA用Ambion’s miRNA Isolation Kit分离微小核糖核酸；(3)微小核糖核酸样品的荧光标记：利用T4 RNA连接酶标记方法进行荧光标记，然后再用无水乙醇沉淀，吹干后用于芯片杂交；(4)杂交与清洗：将RNA溶于16μL杂交液中，于42℃杂交过夜，杂交结束后，先在42℃左右含0.2％SDS，2×SSC的液体中洗4分钟，而后在0.2×SSC液体中室温洗4分钟，玻片甩干后即可用于扫描；(5)芯片扫描：芯片用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪进行扫描；(6)数据提取及分析：采用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行分析，把图像信号转化为数字信号，最后用SAM分析挑选差异表达基因，结果发现，miRNA-563-5p在阿兹海默病患者血清中显著上调。

3.根据权利要求2所述的miRNA，其特征在于，所述miRNA具有辅助抑制阿兹海默疾病进程的功能，取APP转基因小鼠12只，两只作为对照组，实验组10只分别注射miRNA-563-5p核苷酸类似物，对照组与实验组的处理方法相同，仅将miRNA-563-5p核苷酸类似物替换为无意义序列的阴性对照RNA，每隔5日注射一次，持续注射一个月，期间记录小鼠生存状态，1个月后对所有小鼠进行Morris水迷宫实验，测定后发现对照组的两只小鼠的空间学习及记忆力受到损伤，Aβ蛋白沉积量高，测试组小鼠相较于1个月前无学习能力和记忆力的显著降低。

4.根据权利要求3所述的miRNA，其特征在于，通过检测外周血血浆中miRNA-563-5p的表达水平，对阿兹海默病具有诊断和/或预后评估的潜在价值；通过检测抑制miRNA-563-5p的表达水平，对阿兹海默疾病具有预防和/或治疗的潜在价值。