[发明专利]一种甘草素探针及其制备方法和应用

说明书

本发明属于化学和生物技术领域，提供了一种甘草素炔基化衍生物探针及其制备方法和应用，该探针由甘草素最右边的酚羟基被炔丙基修饰构成，具体制备方法是：先对甘草素最左边的酚羟基进行保护，再使甘草素最右边的酚羟基被炔丙基修饰，最后在酸性条件下脱去对甘草素最左边酚羟基的保护，即得甘草素炔基化衍生物探针。该探针能模拟甘草素在细胞内的行为，反映甘草素进入细胞后的行为，如能模拟甘草素的细胞摄入及其在细胞内与靶蛋白的结合情况，结合点击化学反应能将靶蛋白捕获和鉴定出来。

技术领域

本发明属于化学和生物学领域，涉及甘草素探针及其制备方法和应用，本发明的甘草素探针具体可以有效地模拟甘草素的细胞摄入并用于捕获甘草素在细胞内的靶蛋白。

背景技术

甘草中含有大量黄酮成份，其中包括甘草素(Liquiritigenin)，即4’,7-Dihydroxyflavanone(中文名：4’,7-二羟基-黄烷酮)，其结构式如下：

文献报道，甘草素具有抗急性肝损伤(Chem Biol Interact,2006,161(2):125-138)等活性，但其作用机理尚未阐明，将药物分子的酚羟基炔基化修饰常用于捕获药物在细胞内的靶蛋白，以阐明其分子靶点及作用机制。在现有文献中，甘草素的酚羟基炔基化修饰作为探针尚未见报道。

发明内容

本发明的任务是提供一种甘草素炔基化衍生物探针，用于模拟甘草素在细胞中的摄入及其与靶点结合行为。

本发明的另一任务在于提供甘草素炔基化衍生物探针的制备方法；

本发明的又一任务在于提供甘草素炔基化探针在模拟甘草素细胞摄入及甘草素与靶点结合研究中的用途。

实现本发明的技术方案是：

第一方面：本发明提供的具有以下式(Ⅰ)所示化学结构的甘草素炔基化衍生物探针由式(Ⅱ)所示甘草素右边的酚羟基被炔丙基修饰构成。

式(Ⅰ)化合物可作甘草素探针之应用，用于模拟甘草素在细胞内的行为，可以有效地模拟甘草素的细胞摄入并用于捕获甘草素在细胞内的靶蛋白。

第二方面：本发明提供的甘草素炔基化衍生物探针的制备方法包括以下步骤：

步骤一：对式(Ⅱ)所示甘草素左边的酚羟基进行保护得到左边酚羟基被保护的甘草素；

步骤二：再使左边酚羟基被保护的甘草素右边的酚羟基被炔丙基修饰；

步骤三：最后在酸性条件下脱去对甘草素左边酚羟基的保护，即得到权利要求1所述化合物，即本发明提供的甘草素炔基化衍生物探针。

上述步骤一所述的对式(Ⅱ)所示甘草素左边的酚羟基进行保护的方法是：将甘草素与氯甲基甲醚、4-甲氧基氯苄或碘甲烷反应，以使甘草素最左边的酚羟基被甲氧基亚甲基、4-甲氧基苄基或甲基保护。所述的将甘草素与氯甲基甲醚、4-甲氧基氯苄或碘甲烷反应的具体方法是：将甘草素与氯甲基甲醚、4-甲氧基氯苄或碘甲烷溶解在DMF溶剂中，加入K₂CO₃并使其在反应体系中的终浓度为0.01M—0.5M，室温下搅拌24小时；其中甘草素与氯甲基甲醚、4-甲氧基氯苄或碘甲烷的摩尔比为1:1—1:1.5。

上述步骤二所述的使左边酚羟基被保护的甘草素右边的酚羟基被炔丙基修饰的方法是：令甘草素最右边的酚羟基与溴丙炔反应使该酚羟基被炔丙基修饰，得到左边酚羟基被保护的炔丙基修饰的甘草素。所述的令甘草素最右边的酚羟基与溴丙炔反应使该酚羟基被炔丙基修饰的具体方法是：将左边酚羟基被保护的甘草素与溴丙炔溶解在DMF溶剂中，加入K₂CO₃并使其在反应体系中的终浓度为0.01M—0.5M，室温下搅拌24小时；其中左边酚羟基被保护的甘草素与溴丙炔的摩尔比为1:1—1:3。