[发明专利]一种兽用腐败梭菌毒素及其制备方法与专用培养基

说明书

本发明公开了一种兽用腐败梭菌毒素及其制备方法与专用培养基。每100ml培养基由下述物质组成：示蛋白胨(proteose peptone)1.5‑2.0g，酪蛋白胨1.5‑2.0g，酵母浸粉0.5‑0.75g，ZnSO₄·7H₂O 0.14‑0.28mg，Na₂HPO₄·12H₂O 0.5‑0.75g，KH₂PO₄0.03‑0.045g，葡萄糖1‑1.5g，余量为水；所述培养基的pH值为7.5‑8.0。所述腐败梭菌毒素是将腐败梭菌生产菌株接种于培养基中，收集培养物并离心，将上清液过滤即得。按本发明方法毒力最高可提至《中国兽用生物制品规程》制苗标准的10倍，产出投入比可提高至原传统工艺的20倍。并且，用其制备的类毒素疫苗在家兔和绵羊上的相应血清中和效价也分别提高至规程标准的8和8倍。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种兽用腐败梭菌毒素及其制备方法与专用培养基。

背景技术

羊快疫、猝狙、羔羊痢疾和肠毒血症是分别由腐败梭菌、C型产气荚膜梭菌、B型产气荚膜梭菌和腐败梭菌引起的羊常见多发性传染病(陆承平.兽医微生物学[M].北京：中国农业出版社,2013:192-202.)，它们常常合并发生，病程急剧，发病动物常常不出现症状即行死亡，死亡率高，危害大。因此，免疫接种是控制这些疫病的唯一有效途径。欧美、澳大利亚等畜牧业发达国家均把牛羊的四种疫病作为必须免疫预防的疫病，并有多种含有预防这些疫病成分的疫苗投放市场(Animal and Plant Health Inspection Service,USDA.9CFRCh.I(1-1-07Edition)[S].Washington:U.S.GOVERNMENT PRINTING OFFICE,2007.3、British Pharmacopoeia(Veterinary)[S].London:The Stationery Office,2005.)。我国也采取免疫接种的方法预防这些疫病并取得了良好的效果。我国目前用于预防这些疫病的疫苗有羊快疫、猝狙、肠毒血症三联灭活疫苗(液体苗)、羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗(液体苗)和羊梭菌病多联干粉疫苗(干粉苗)(中国兽药典委员会编.中华人民共和国兽药典二○一○年版三部[S].北京：中国农业出版社,2011.5、农业部兽用生物制品规程委员会编.中华人民共和国兽用生物制品规程二○○○版[S].北京：化学工业出版社,2000.)，预防效果确实。据2015年批签发统计，年产量达2.5亿头份，但实际需要远大于此。年产值约2500万元到3000万元。

然而，目前市场上使用的疫苗普遍以牛肉和肝脏的酶消化液为原材料来制备培养基，用这种方法制备培养基其制备过程繁琐、耗时长、需要人力多，尤为重要的是常因原材料质量参差不齐出现产毒性能不稳定的现象，这影响了疫苗的质量，也给疫苗生产带来了极大的浪费和高额的成本。并且，在2006年到2015年之间以血清中和法进行效力检验结果不合格的33批产品中，有15批产品的腐败梭菌组分效价不合格。因此，研发出质量可靠、产毒力高、稳定性好的腐败梭菌毒素制备方法与专用培养基显得尤为必要。

发明内容

本发明一个目的是提供一种腐败梭菌产毒培养基。

本发明提供的培养基，包括溶质；

所述溶质由如下质量分数的物质组成：1.5-2.0示蛋白胨、1.5-2.0酪蛋白胨、0.5-0.75酵母浸粉、0.00014-0.00028ZnSO₄·7H₂O、0.5-0.75Na₂HPO₄·12H₂O、0.03-0.045KH₂PO₄和1-1.5葡萄糖。