[发明专利]一种抗草甘膦GAT转基因农作物的金标检测试纸条

说明书

本发明提供了一对杂交瘤细胞株，该对杂交瘤细胞株包括独立存放的第一杂交瘤细胞株和第二杂交瘤细胞株；所述第一杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.12277；所述第二杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC NO.12278。本发明还提供了由这两株杂交瘤细胞分泌的一对配对单克隆抗体和它们在检测转GAT的转基因农作物中的用途以及一种免疫胶体金试纸条和检测转GAT的转基因农作物的方法。通过上述技术方案，本发明能够通过免疫胶体金试纸条，对GAT蛋白的检测取得1ng/mL的灵敏度，对28种非转基因作物和17种不同来源的各种非GAT转基因作物也不呈现交叉反应，具有较高的灵敏度和特异性。

技术领域

本公开涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞对、一种单克隆抗体对、该单克隆抗体对在检测转GAT的转基因农作物中的用途以及一种免疫胶体金试纸条和检测转GAT的转基因农作物的方法。

背景技术

草甘膦(N-phosphonomethyl-glycine,glyphosate)是美国孟山都公司于20世纪70年代开发，目前在全世界广泛使用的一种非选择性、内吸传导型的除草剂。草甘膦的特点是低成本，对大多数植物和微生物都有很高的毒性，但是对人畜低毒、低残留，具有较高的商业价值。但由于草甘膦的光谱灭生性，对农作物也会造成危害，其作用机理是竞争抑制莽草酸合成途径中5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)的活性，该酶是真菌、细菌、藻类、高等植物体内芳香族氨基酸(包括色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸)生物合成过程中的一个关键酶，是植物和微生物共有。研发对草甘膦抗性的农作物，对农业生产发展和草甘膦工业都有一定的促进作用。EPSPS合成酶不受草甘膦抑制，具有草甘膦抗性，是当今商业化草甘膦耐受农作物最广泛的作用模式。但是，转EPSPS作物并不能对草甘膦起到解毒的效果，而是过量产生EPSPS来耐受高浓度的草甘膦，因此存在草甘膦在分生组织积累的情况，影响农作物的生长发育和产量。更新换代转基因产品，用转基因技术克服转基因作物产生的问题是目前研究的热点之一。研究发现了一种新的草甘膦代谢失活机制，应用草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyhransferase，GAT)将草甘膦转变为对植物无毒的N-乙酰草甘膦(NAG)，失去除草剂活性。这一发现揭示了新的草甘膦耐受机制，为培育草甘膦耐受农作物提供了另一种可选模式。杜邦先锋公司于2010年已经获得农业部转基因生物安全证书，可进口耐除草剂转基因大豆356043作为食品与饲料加工原料。该转基因大豆利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)优化获得的gat基因，具有对除草剂草甘膦的耐性。2006年以来，已在美国、加拿大等17个国家和地区获得作为食品与饲料加工原料进口的许可；在美国、加拿大等11个国家和地区获得商业化种植许可。

根据国际农业生物技术应用服务组织ISAAA的数据，截止2015年，全世界已有28个国家种植转基因作物，全球转基因作物种植面积达1.797亿公顷。一方面转基因作物的种植面积逐渐增大，另一方面，社会对转基因安全性的争论愈演愈烈。转基因作物具有品质好、耐病虫害等优点，但是不排除转基因作物对生态环境和食品安全存在的潜在风险。因此，需要对转基因产品实行有效的监管、筛选和安全评估，行之有效的检测技术/工具是实现这一目标的有力支持。现有的检测技术，如酶免法、放免法等，检测时间长(酶免检测时间需2h、放免检测需3h左右)，需要特殊的检测设备，如酶标仪、放免闪烁仪、离心机等，检测专用的场地等，检测成本较高，需要专业的操作人员进行检测，实践推广应用的空间存在一定局限性。因此，需要有一种操作简便、结果准确可靠、可快速检测转基因植物中GAT蛋白的装置。

双抗体夹心法是应用最广泛的一种免疫结合胶体金层析法。利用抗原抗体反应相结合的原理，用免疫金标记技术，以微孔膜为固相载体，实现对样品的定性、半定量等检测。