[发明专利]一种稳定的用于FAMA法检测的抗原片的制备方法

说明书

本发明提供了一种检测水痘带状疱疹病毒(VZV)抗体的膜抗原荧光抗体试验(FAMA法)抗原片制备及保存方法，包括将水痘‑带状疱疹病毒株感染2BS细胞，置35℃、5％CO₂培养箱培养至病毒复制高峰，经胰蛋白酶消化，进行细胞计数，选择适宜的细胞数量制备病毒细胞悬液，并将悬液滴入12孔载玻片上，经37℃、5％CO₂培养箱培养、冷丙酮固定、清洗干燥后，在细胞表面滴加保护液封片、抽真空的过程，该片置2‑8℃冰箱能保存一年以上。

技术领域

本发明涉及一种稳定的用于FAMA法检测抗原片的制备方法及其所制备的抗原片。具体涉及一种用水痘带状疱疹病毒感染细胞至细胞病变后，消化制成细胞悬液，滴片、待干燥后，滴加保护液，待干燥后，真空封膜，可在2-8℃长期保存的一种制备方法。

背景技术

FAMA法是目前国际上公认的水痘带状疱疹病毒抗体检测的金标准，具有灵敏度高，特异性强的特点。但是，抗原片的制备和保存却是本实验的决定性的环节。

传统的FAMA法，各实验室均采用水痘带状疱疹病毒Oka株感染二倍体细胞制备抗原片，并且使用传统方法制备的抗原片保存期短，在2-8℃情况下，抗原片病毒很快失活不能与特异性抗体相结合。而一种水痘病毒抗体检测用抗原片的制备方法专利中，利用VZV84-7株感染VERO细胞制备抗原片，可在低温或超低温冰箱存放至1年，但是，一般实验室无法满足该条件，限制了该方法的应用。该方法制备的抗原片在2-8℃情况下保存会很快使病毒细胞片失活，而在实验中大批量、同一批次抗原片的使用，是很困难的，各实验室均采取了用多次制备的抗原片，来检测同一批大批量VZV血清样本，误差较大。直至目前也尚未查到如何延长抗原片的保存及抗原片的制备新方法的文献报道。

发明内容

本发明提供一种利用保护剂提高VZV病毒抗原片稳定性的方法及所获得的抗原片。

在一些可选的方式中，提供一种应用于膜抗原荧光抗体试验(FAMA法)的稳定抗原片制备方法，其是将水痘带状疱疹病毒感染VZV易感细胞后获得的抗原片滴加保护液，干燥后，抽真空密封保存。

在一些可选的实施方式中，所述方法中所述保护液含有2-8％的蔗糖、海藻糖、乳糖、葡聚糖和/或甘露糖中的一种或几种。

在一些可选的实施方式中，所述方法中所述抗原片是经水痘带状疱疹病毒感染VZV易感细胞，置35℃、5％CO₂培养箱培养至病毒复制高峰，经胰蛋白酶消化，经细胞计数，选择约2.5～3.5×10⁵/ml细胞数量制备病毒细胞悬液，将细胞悬液滴入12孔载玻片上，经37℃、5％CO₂培养箱培养、冷丙酮固定、清洗干燥后制备获得。

在一些可选的实施方式中，所述方法的制备过程是采用水痘-带状疱疹病毒VZVOka株感染2BS细胞制备抗原片。

在一些可选的实施方式中，所述方法的保护液中含有1％-3％的乳糖和2％-4％的海藻糖。

在一些可选的实施方式中，所述方法的保护液中含有1％-3％的乳糖、2％-4％的海藻糖和1％-3％的葡聚糖。

在一些可选的实施方式中，所述方法的保护液中含有2％的乳糖、3％的海藻糖和2％的葡聚糖。

在一些可选的实施方式中，所述方法向样品孔加入上述保护液10-30微升，室温或2-8℃条件下封闭4小时以上。

在一些可选的实施方式中，所述方法配制保护液的缓冲液为pH值为7.0-7.4的PBS或TBS。

本发明还提供利用根据如前所述的方法制备的VZV病毒抗原片。

具体实施方式