[发明专利]一种绿豆子叶节为外植体的丛生芽诱导方法

权利要求书

1.一种绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的绿豆丛生芽诱导方法包括以下步骤：

(1)种子筛选；

(2)灭菌消毒；

(3)外植体制备：生长4天后，挑选生长健壮，无菌的绿豆小苗，在超净工作台内用无菌手术刀切除子叶、根和叶片，保留子叶结做为外植体；

(4)丛生芽诱导：将制备的外植体，下胚轴向下，轻轻插入诱导培养基中，保持子叶节在培养基上方；

(5)芽增殖培养：生长10～15天后，选择愈伤组织生长较好的外植体，切除底部褐化的组织，移入新的芽增殖培养基；其中芽增殖培养基含有0.01-0.1mg/L的Vc；

所述的步骤除步骤(1)外，其余均采用无菌环境，步骤(2)、(4、(5))中绿豆在培养基上生长的步骤环境条件为光照强度1500～2000lx，光照时间16h/d，温度维持在25±2℃。

2.根据权利要求1所述的绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的种子筛选包括：选择再生能力强的绿豆品种，对每个种子进行表面观察，选择表面光滑且没有破皮的绿豆种子。

3.根据权利要求1所述的绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的灭菌消毒包括：以步骤(1)选择的绿豆种子为材料，用乙醇消毒后，然后用0.1％HgCl消毒，无菌水冲洗；再用无菌滤纸吸干种子表面水分后接种到pH为5.8～6.0的1/2MS培养基上生长。

4.根据权利要求1所述的绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的外植体为保留部分下胚轴和很少量上胚轴的子叶结。

5.根据权利要求4所述的绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的诱导培养基为添加BA 1mg/L+KT 1mg/L+IBA 0.05mg/L的1/2MS培养基，pH为5.8～6.0。

6.根据权利要求4所述的绿豆丛生芽诱导方法，其特征在于所述的芽增殖培养基为添加BA 1mg/L+KT 1mg/L+IBA 0.01mg/L+Vc 0.02mg/L的1/2MS培养基，pH为5.8～6.0。