[发明专利]细鳞壮鳕的荧光PCR检测方法及其引物和探针

说明书

本发明公开了一种细鳞壮鳕的荧光PCR检测方法及其引物和探针，该方法设计细鳞壮鳕的引物和探针，并提取细鳞壮鳕样品中的DNA；根据所述引物和探针及DNA，进行实时荧光PCR扩增反应，获得检测结果；将检测结果与预设的Ct值比较，判定样品特性。本发明可有效地以实时荧光PCR方法对细鳞壮鳕进行物种成分检测，结果精确，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种细鳞壮鳕的荧光PCR检测方法及其引物和探针。

背景技术

鳕鱼被称为“餐桌上的营养师”，可见它的营养价值之高。但市面上鳕鱼的名目繁多，真鳕、银鳕、黑鳕、狭鳕、青鳕、水鳕，龙鳕、圆鳕、扁鳕等等，这些鳕鱼名只能算是一种商品名，生物学分类中只有鳕形目，鳕科，鳕属的鱼类才是真正的鳕鱼，而鳕属只包括大西洋鳕鱼(Gadus morhua)，格陵兰鳕鱼(Gadus ogac)和太平洋鳕鱼(Gadus macrocephalus)这3种，但格陵兰鳕鱼产量较低市场上少见。

细鳞壮鳕(Albatrossia pectoralis)属于鳕形目(Gadiformes)鼠尾鳕科(Macrouridae)壮鳕属(Albatrossia)，是一种常常被用来当作鳕鱼销售的廉价鱼类。鳕鱼往往以肉片或肉段的形式进行销售，因此细鳞壮鳕一旦去头、去尾、去皮、切片后从外形上的确和真鳕鱼非常相似。

形态学方法是传统的动物种属鉴定方法，但市售的鳕鱼往往都以肉段肉块的形式出现，因此，单纯形态学方法进行物种鉴定往往难度较大，不能满足对鱼肉制品售假现象的监管与控制的需求。

而种属鉴定的免疫学方法大都直接鉴定样本中的蛋白成分，其基本原理是抗体抗原反应，但免疫学方法存在对样本材料要求高，检测准确率低等缺陷，如动物食品若经过加热、腌制等处理，其蛋白结构一旦遭到破坏，免疫学方法便不再适用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种细鳞壮鳕的荧光PCR检测方法及其引物和探针，可有效地以实时荧光PCR方法对细鳞壮鳕进行物种成分检测，结果精确，灵敏度高。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种细鳞壮鳕的引物和探针，其中，所述引物和探针由下表中的序列组成：

其中，AP-F表示上游引物；AP-R表示下游引物；AP-P表示探针。

为解决上述问题，本发明还提供一种细鳞壮鳕的荧光PCR检测方法，其中，至少包括如下步骤：

S1：设计细鳞壮鳕的引物和探针，所述引物和探针由下表中的序列组成：

其中，AP-F表示上游引物；AP-R表示下游引物；AP-P表示探针；

S2：提取细鳞壮鳕样品中的DNA；

S3：根据所述引物和探针及DNA，进行实时荧光PCR扩增反应，获得检测结果；

S4：将检测结果与预设的Ct值比较，判定样品特性。

其中，所述上游引物的浓度为10pmol/μL，下游引物的浓度为10pmol/μL，探针的浓度为10pmol/μL。

其中，步骤S2具体为：

S21：获取0.2g细鳞壮鳕样品，并在液氮中研磨；

S22：使用DNA抽提试剂盒进行DNA抽提；

S23：将抽提后的DNA溶解在100μL水中，获得DNA液。

其中，步骤S3具体为：