[发明专利]一种基于氢核磁定量分析技术测定人参皂苷Rd对照品含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于氢核磁定量分析技术测定人参皂苷Rd对照品含量的方法，包括如下步骤：1)测定人参皂苷Rd和内标物在不同溶剂中出峰情况，选定溶剂和定量峰；2)测定人参皂苷Rd和内标物定量目标峰在选定溶剂中的纵向弛豫时间T₁；3)根据T₁值设置核磁共振波谱仪的倾倒角和弛豫延迟时间，倾倒角为30‑90°，弛豫延迟时间d1≥(7/3×T_1max‑5×T_1max)；4)根据步骤2)所设定的参数测定样品和内标物中各定量目标峰的积分面积，得出人参皂苷Rd相对于内标物的摩尔比；5)根据内标物的质量，计算人参皂苷Rd的质量，然后计算人参皂苷Rd的纯度。该方法具有操作简便，内标物廉价易得，结果准确且重复性好等优点。

技术领域

本发明具体涉及一种基于氢核磁定量分析技术测定人参皂苷Rd对照品含量的方法。

技术背景

人参皂苷(ginsenoside)为四环三萜达玛烷型皂苷，人参的特征性化学成分，具有改善免疫功能、提高记忆、延缓衰老、改善心血管功能等作用。人参Ginseng Radix etRhizoma，五加科人参属植物人参Panax ginseng C.A.Meyer的干燥根和根茎，传统名贵中药，《神农本草经》列为上品，载其“味甘，微寒，主补五脏，安精神，开心益智，久服轻身延年”，中国药典2015版载其“大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智”，为广为认可的补益药之一。

目前，人参皂苷含量测量主要使用反相高效(超高效)液相色谱仪，配合DAD或者ELSD检测器，或者高效液相色谱串联质谱法进行测定。这些分析测试方法均需要高纯度标准品作对照，并且杂质与目标物响应值有差异，会影响其准确性。氢核磁定量分析技术(Quantitative hydrogen nuclear magnetic resonance spectroscopy)，是基于核磁共振原理的一种定量分析方法，其原理是不同化学环境的氢原子的共振峰面积，只与其原子数目有关。方法简单、快捷，不破坏样品，可以不使用待测组分的对照品，而使用已知含量的普通化学物质为参比，相比于高效液相色谱法、气质及液质联用等定量技术具有独特的优势。但目前没有运用氢核磁定量分析技术对人参皂苷Rd含量测定的相关方法。

发明内容

核磁定量的原理是在适当的仪器参数条件下含氢有机化合物¹H NMR波谱信号直接与原子数目成正比，因此在实验参数设定时，需要被测物与内标物上的共振峰与其对应的原子数尽可能保持一致，若选择不合适位置的氢进行纯度的测定，杂质、组分、内标物和溶剂信号容易相互干扰或重叠，导致积分不准确，影响结果的可靠性。人参皂苷Rd的分子量高达946，其化学结构式如(图1)所示，含有众多羟基活泼氢，采用氢核磁定量分析技术进行测定时，信号重叠严重。含有活泼氢的氘代溶剂可以抑制化合物活泼氢信号，发明人经过研究发现，人参皂苷Rd信号在加入一定量重水之后，活泼氢信号被抑制。但重水H信号随着重水比例的变化而发生移动，且当重水比例少，活泼氢信号抑制不完全，定量峰积分准确度受影响，重水比例大，重水信号会掩盖定量峰或造成定量峰附近基线不平，选择对人参皂苷合适的重水比例对核磁共振分析具有重要意义。

同时，不同位移峰都会对应不同的倾倒角和弛豫时间等参数，选择对定量峰合适的脉冲倾倒角和弛豫时间，是目前限制采用氢核磁共振测定人参皂苷Rd纯度的技术难题之一。而脉冲倾倒角和弛豫时间是建立氢核磁共振定量方法中的两个重要仪器参数，直接影响最终定量结果的准确性，而在之前运用氢核磁共振分析对照品的方法中，这两个参数常被忽视，导致方法的准确性和便捷性受到影响。

为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种基于氢核磁定量分析技术测定人参皂苷Rd对照品含量的方法，该方法具有操作简便，内标物廉价易得，结果准确且重复性好等优点。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种基于氢核磁定量分析技术测定人参皂苷Rd对照品含量的方法，包括如下步骤：