[发明专利]口服灭活猪流行性腹泻病毒的微胶囊制备方法

说明书

口服灭活猪流行性腹泻病毒的微胶囊制备方法，它涉及微胶囊制备领域。本发明针对现阶段国内防控猪流行性腹泻病毒防控中口服灭活疫苗中的技术不足，基于灭活猪流行性腹泻病毒和口服微胶囊制备技术，用于口服灭活猪流行性腹泻病毒的微胶囊制备方法。动物实验结果表明，血清中和抗体效价检测结果说明该微囊疫苗能诱导仔猪黏膜免疫和系统免疫应答，并产生了较高水平的血清和黏膜抗体，同时客观说明了该微囊疫苗具有一定的缓释效果。微囊疫苗抗原物质被仔猪口服后，能够诱导仔猪特异性抗体IgG和IgA的表达，并增加了仔猪对PEDV的抵抗力，降低了仔猪死亡率，攻毒保护率高于对照组60‑75％。

技术领域

本发涉及流行性腹泻病毒的灭活技术及微胶囊制备技术等方法，具体涉及口服灭活猪流行性腹泻病毒的微胶囊制备方法。

背景技术

感染猪流行性腹泻病毒(PEDV)是导致猪病毒性腹泻(PED)的主要原因之一，特征为严重的肠炎、呕吐、水样腹泻和体重减轻等。该病一年四季均有发生，尤其在冬季严重，各种年龄阶段的猪群均容易感染，但对仔猪的危害最大，病死率最高。严重的仔猪死亡率使得PEDV感染成为中国养猪业损失的一大因素。冠状病毒的生命循环始于入侵现细胞。完成吸附后,病毒下一步需要进入宿主细胞的细胞浆质中。病毒可以插入细胞膜并发生病毒与帮细胞的膜融合,从而释放病毒的基因组进入细胞浆引起仔猪小肠上皮细胞的病变。

新生仔猪出生后，被动免疫系统并没有建立，主要依靠母源抗体抵抗病毒感染。由于1周龄内仔猪本身免疫系统尚未完全发育成熟,感染PEDV后免疫系统可呈现损伤,如淋巴滤泡内出现核浓缩、碎裂等病变,但肠系膜淋巴结和派伊尔氏结仍见有淋巴细胞增殖反应,肠粘膜固有层出现大量的淋巴细胞和浆细胞,而1月龄以上仔猪和成年猪都可见到明显的局部粘膜免疫反应。另外，新生仔猪生产后的1-7天，且短时间是仔猪感染病毒发病主要时期，发病率可达78％，致死率可达100％。而肌肉注射并达到最佳抗体时间需要7天，切其体内含有母源抗体会干扰病毒粒子递呈给免疫细胞，并不能发挥疫苗效果。然而黏膜免疫的激活并不受系统免疫和母源抗体干扰，3天即可以产生特异性IgA抗体效价顶峰，抗体有效中和感染的PEDV，发挥免疫保护作用。

研究发现,分泌型抗体lgA是保护猪体不受感染和免于发病的关键因素。slgA抗体可以从口腔途径接种后在肠液和血清中检出。而肠道外接种途径接种猪则检不出slgA。研究认为,病毒经口到肠道后,IgA免疫细胞在肠内经抗原致敏后转移到乳腺定位,并将IgA抗体分泌到初乳和常乳内。很早就有提出,乳腺组织IgA是来源于肠道细胞分泌的。因此,使用灭活苗时由于抗原对肠表层下IgA浆膜细胞刺激很小,相应地乳内IgA就很少。口服、鼻腔或肌肉接种效果一般均较差，其主要原因是口服灭活病毒经胃酸和肠液消化降解，并不能有效发挥其免疫原型。经鼻腔喷鼻免疫，鼻腔的产生的黏膜免疫需要再经淋巴循环运送至肠粘膜表面，并不能在肠粘膜下淋巴系统产生免疫记忆细胞，仍不能产生足够量的IgA。且肌肉注射主要激活系统性免疫，并不能主要激活黏膜免疫系统的浆细胞，产生黏膜抗体IgA。研究发现,IgA乳汁抗体不能被仔猪吸收,但在肠道内被动免疫中起重要作用。吮乳仔猪由于经常摄入含有PEDV中和抗体的初乳和常乳而获得保护,这些抗体在肠腔内能中和感染的PEDV,从而保护易感染的小肠上皮细胞不受损伤。因此，如能把足够量的病毒粒子有效地呈递到仔猪小肠黏膜，不受胃酸和肠粘液的消化降解，抗原激活仔猪黏膜免疫系统，诱导产生足够量的黏膜抗体Ig，对PEDV的疾病感染的预防和口服疫苗的研制提供新的思路。