[发明专利]PD-L1 CAR-NK细胞及其制备和应用

说明书

本发明提供一种PD‑L1 CAR‑NK细胞，所述PD‑L1 CAR‑NK细胞能够表达嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包含抗原结合结构域、跨膜结构域和共刺激信号传导区，所述的抗原结合结构域能够特异性结合肿瘤特异性抗原PD‑L1配体，并通过跨膜结构域和共刺激信号传导区激活该NK细胞。本发明提供的PD‑L1 CAR‑NK细胞至少具有如下优势之一：本发明通过将PD‑L1受体用于CAR‑NK细胞的构建，其以PD‑L1分子为靶抗原，利用PD‑L1 CAR‑NK细胞特异性地杀伤肿瘤细胞。其可作为肿瘤类疾病的治疗药物，用于PD‑L1分子高表达的肿瘤的治疗，为肿瘤的预防和治疗提供了新的方法。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及PD-L1 CAR-NK及其制备和应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。CAR基因主要包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域：前者用于识别肿瘤表面特异性分子和后者用于启动识别肿瘤表面分子后的免疫细胞应答，发挥细胞毒作用。这是一个出现了很多年，但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。但是CAR-T存在本身的缺陷，一方面临床使用中存在细胞因子风暴的风险，难以控制，严重时会造成患者死亡。另一面，CAR-T属于个性化治疗，不能异体回输限制了其大规模的制备。

自然杀伤(natural killer，缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分，先天免疫系统反应的关键性介质细胞。NK细胞是一种广谱免疫细胞，具有快速发现和摧毁异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能，而且不需要提前致敏或HLA配型，即可展示强大的溶解异常细胞的活性。使用免疫细胞(包括NK细胞)来治疗癌症是近年来新趋势，这种新疗法有望为对传统手术、化疗和放疗无效的肿瘤提供了新的治愈希望。

程序性死亡受体1(PD-1,programmed cell death-1)是一种重要的免疫抑制分子。为CD28超家族成员，其最初是从凋亡的小鼠T细胞杂交瘤2B4.11 克隆出来。以PD-1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意义。其配体PD-L1也可作为靶点，相应的抗体也可以起到相同的作用。由日本京都大学本庶佑教授于1992年发现。

程序性死亡配体1(PD-L1,programmed cell death-Ligand 1)是大小为 40kDa的第一型跨膜蛋白，PD-L1(B7-H1)属于B7家族，具有IgV和IgC样区、跨膜区及胞浆区尾部，PD-L1与其T细胞上的受体PD1相互作用，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用；正常情形下免疫系统会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，促发具抗原特异性的细胞毒杀性T细胞 (CD8+Tcell)增生。而细胞程序化死亡受体-1(PD-1)与细胞程序性死亡 -配体1(PD-L1)结合，可以传导抑制性的信号，降低淋巴结CD8+T细胞的增生，而且PD-1还可以借由调节Bcl-2基因，控制淋巴结中抗原特异性T 细胞的聚积。该分子具有广泛的组织表达谱，在一些肿瘤细胞系上有较高的表达，许多研究均表明其与肿瘤的免疫逃逸机制相关。肿瘤部位的微环境可诱导肿瘤细胞上的PD-L1的表达，且表达广泛，表达的PD-L1有利于肿瘤的发生和生长，诱导抗肿瘤T细胞的凋亡。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种PD-L1 CAR-NK细胞及其制备和应用，该细胞能够特异性识别和杀伤肿瘤，具有更高效的肿瘤杀伤活性。

本发明提供一种PD-L1 CAR-NK细胞，所述PD-L1 CAR-NK细胞能够表达嵌合抗原受体，其中，所述嵌合抗原受体包含抗原结合结构域、跨膜结构域和共刺激信号传导区，所述的抗原结合结构域能够特异性结合肿瘤特异性抗原PD-L1配体，并通过跨膜结构域和共刺激信号传导区激活该NK细胞。