[发明专利]一种评价微生物降解饲料黄曲霉毒素效率的方法

权利要求书

1.一种评价微生物降解饲料黄曲霉毒素效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）霉变饲料用仿生消化法进行消化，并测定其干物质消化率；

（2）将降解黄曲霉毒素的微生物和相应的培养基加到上述消化后饲料中作为试验组，并以未加微生物和培养基的上述消化后饲料作为对照组，将试验组和对照组置于培养箱中进行降解培养；

（3）培养结束后，测定试验组和对照组中黄曲霉毒素的含量，计算黄曲霉毒素的降解率；

黄曲霉毒素的降解率=[（对照组中黄曲霉毒素含量-试验组中黄曲霉毒素含量）/对照组中黄曲霉毒素含量×100%]/干物质消化率；

所述方法还包括：在步骤（1）之前，设置不同的肠道外源酶混悬液用于仿生消化法，测定用不同肠道外源酶混悬液的仿生消化法消化后的饲料的干物质消化率，通过最高干物质消化率，确定仿生消化法中使用的最优肠道外源酶混悬液；

所述仿生消化法的具体步骤为：

a）口腔模拟：将饲料加入缓冲溶液中，混合均匀，调节pH到6.8，然后加入淀粉酶溶液，得到口腔模拟体系，37℃-39℃，150r/min消化1-3h；

b）胃模拟：消化结束后，向上述消化后的口腔模拟体系中加入HCl溶液，混合均匀，并调节pH至2.0，然后加入酸性外源酶混悬液，得到胃模拟体系，37℃-39℃，150r/min消化4-9h；

c）小肠模拟：向消化后的胃模拟体系中加入NaOH溶液，并调节pH至6.8，然后加入肠道外源酶混悬液，得到肠道模拟体系，37℃-39℃，150r/min消化16-20h；

所述降解黄曲霉毒素的微生物为枯草芽孢杆菌，或由降解黄曲霉毒素的微生物生产制备的微生态制剂；

所述仿生消化法中饲料、缓冲溶液、淀粉酶溶液、HCl溶液、酸性外源酶混悬液、NaOH溶液、肠道外源酶混悬液的加入量比值为：2g：20-30mL：1-1.5mL：8-12mL：1-1.5mL：3-7mL：2-3mL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为0.1 M、pH6.0的PBS缓冲溶液；所述HCl溶液为0.2 M的HCl溶液；所述NaOH溶液为0.6 M的NaOH溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述淀粉酶溶液浓度为4-10mg/mL；所述酸性外源酶混悬液浓度为10-25mg/mL；所述肠道外源酶混悬液包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶；其中，蛋白酶:淀粉酶:脂肪酶的质量比=（1~4）:1:1，蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的总浓度为8-15mg/mL；蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的总质量与果胶酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶四者的总质量之比为（5-15）:1。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述降解培养的条件为：37℃避光培养48h 。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述试验组和对照组中黄曲霉毒素的含量采用免疫亲和柱-高效液相色谱法测定。