[发明专利]弓形虫基因缺失虫株在制备抗肿瘤生物制剂中的用途

说明书

本发明公开了弓形虫基因缺失虫株在制备抗肿瘤生物制剂中的应用，所述弓形虫基因缺失虫株为同时缺少了LDH1与LDH2基因，或者同时缺少了LDH1与OMPDC基因的弓形虫突变虫株。本发明旨在提供一种用减毒弓形虫生物制剂治疗动物黑色素瘤等实体瘤的方法，确立了其剂型，探明了虫株的接种程序及接种剂量，通过小鼠实验证明其具有较好的抗动物黑色素瘤等实体瘤作用，有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及弓形虫基因缺失虫株在制备抗肿瘤生物制剂中的用途，本发明还涉及一种抗肿瘤生物制剂。

背景技术

随着社会的飞速进步和人民物质生活水平的提高，宠物的饲养量快速增多且宠物与人的关系也愈加密切，犬猫等宠物已然成为人们非常重要的伴侣。与此相对应的是人们对于宠物的健康和它们的福利也越来越重视。伴随宠物寿命的延长，它们发生疾病的频率也逐渐增加。犬猫肿瘤病为，近年来呈上升趋势。随着宠物年龄的增长，肿瘤疾病，如皮肤瘤、淋巴瘤等是犬猫等宠物的常见多发病，是危害宠物健康的主要杀手之一，年龄在10年以上的犬与猫，一半以上最终死于癌症。目前肿瘤疾病治疗费用昂贵且效果不理想，因此开发新的治疗手段仍十分重要。

弓形虫是一种可以进行体外培养的单细胞原虫，在全世界范围内广泛流行，感染人、猫和猪等几乎所有温血动物，呈机会性致病。目前的研究表明减毒活疫苗是弓形虫疫苗设计最为有效的途径。突变弓形虫虫株在免疫后能够引起免疫反应特征，因而具有抗动物肿瘤的潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种弓形虫基因缺失虫株在制备抗肿瘤生物制剂中的新用途，本发明的另一个目的是提供一种抗肿瘤生物制剂。

所述的弓形虫基因缺失虫株，是同时缺少了弓形虫LDH1与LDH2基因，或者同时缺少了LDH1与OMPDC基因的弓形虫虫株。

其中，所述缺少了LDH1与LDH2基因的弓形虫虫株，申请人已于2017年3月15日申请了中国发明专利，专利号为201710153753.X，该申请已于2017年9月22日公开，公开号为CN107190025 A。

其中，所述缺少了LDH1与OMPDC基因的弓形虫虫株，申请人已于本申请的同日向国家知识产权局递交了发明专利申请，专利名称为“缺失OMPDC和LDH1基因的弓形虫减毒活疫苗”。

申请人通过向小鼠皮内接种黑色素瘤B16F1细胞，然后瘤内接种弓形虫基因缺失虫株的速殖子混悬液，验证弓形虫基因缺失虫株的抗肿瘤效果，结果发现：接种虫株的治疗组瘤体重量显著小于对照组，说明弓形虫基因缺失虫株有抑制肿瘤的生长、降低瘤体重量的效果；20天内，治疗组小鼠均存活，而对照组小鼠均死亡，脾脏重量分析结果显示：治疗组小鼠脾脏平均重量大于对照组，并且治疗组的IFN-γ和IFN-a水平显著升高，提示弓形虫基因缺失虫株可刺激机体产生较强的细胞免疫应答。因此，本发明提供的两种弓形虫基因缺失虫株有制备抗肿瘤生物制剂的潜力，尤其是抗黑色素瘤生物制剂的潜力。

申请人提供的一种抗肿瘤生物制剂，它是弓形虫基因缺失虫株的速殖子混悬液，所述弓形虫基因缺失虫株是同时缺少了LDH1与LDH2基因，或者同时缺少了LDH1与OMPDC基因的弓形虫虫株。

优选地，所述肿瘤为黑色素瘤。

优选地，所述速殖子混悬液的溶剂为无血清的DMEM溶液或者PBS。

进一步优选地，所述的抗肿瘤生物制剂，为瘤体内注射生物制剂。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种用减毒弓形虫生物制剂治疗动物黑色素瘤等实体瘤的方法，确立了其剂型，探明了虫株的接种程序及接种剂量，通过小鼠实验发现其对于黑色素瘤有较好的治疗作用，具有很好的应用价值。按照其治疗黑色素瘤的原理，该方法同样具有治疗其它实体瘤的潜力。

附图说明