[发明专利]缺失OPRT和LDH1基因的弓形虫减毒活疫苗及其制备方法有效
| 申请号： | 201810127384.1 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108379570B | 公开（公告）日： | 2020-08-11 |
| 发明（设计）人： | 申邦;周太芳;夏宁波;赵俊龙;周艳琴;方瑞;贺兰;潘明;崔建敏;杨旭柯 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | A61K39/002 | 分类号： | A61K39/002;A61P33/02;C12N1/11;C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司 42104 | 代理人： | 徐绍新 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 缺失 oprt ldh1 基因 弓形虫 减毒活 疫苗 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种预防弓形虫感染的减毒活疫苗，其特征在于：含有同时缺失了乳清酸磷酸核糖转移酶基因和乳酸脱氢酶1基因的弓形虫疫苗虫株，其中，乳清酸磷酸核糖转移酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，乳酸脱氢酶1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.如权利要求1所述的预防弓形虫感染的减毒活疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)出发弓形虫虫株具有乳清酸磷酸核糖转移酶基因和乳酸脱氢酶1基因，所述乳清酸磷酸核糖转移酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述乳酸脱氢酶1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
2)通过同源重组的方法，经过药物筛选、PCR鉴定获得的弓形虫疫苗虫株为缺失乳清酸磷酸核糖转移酶基因和乳酸脱氢酶1基因，并且该疫苗虫株切除了药物筛选标签；
3)弓形虫疫苗虫株的体外培养；
4)以无血清的DMEM溶液或者PBS作为溶剂制成弓形虫疫苗虫株的速殖子混悬液。
3.根据权利要求2所述的预防弓形虫感染的减毒活疫苗的制备方法，其特征在于：所述弓形虫疫苗虫株的体外培养需在细胞培养基中加入尿嘧啶，与宿主细胞共同培养。
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