[发明专利]一种利用化学发光增强子修饰的抗体检测目标物的方法

说明书

本发明公开了一种将化学发光底物的增强子修饰到抗体上，实现对目标物的浓度等进行检测的方法。所述方法包括：将对化学发光信号有增强作用的化合物标记到抗体1上，将化学发光的催化物质如辣根过氧化氢酶、碱性磷酸酶等标记到另一个抗体2上；而鲁米诺、过氧化物等发光底物溶于溶液中，当溶液中存在被测目标物时，抗体1和抗体2与被测物结合，利用催化物质与增强子的空间靠近来增强化学发光效果。本发明是一种均相、不需分离纯化等步骤的检验方法。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，尤其是涉及一种利用化学发光增强子修饰的抗体检测目标物的方法。

背景技术

免疫法是当前体外诊断试剂领域重要的检测手段。主要检测对象是多种多样的蛋白质(抗原)，主要利用了两种抗体与抗原形成“三明治”结构，实现检测目的。目前绝大多数的免疫方法都是利用固相载体(例如96孔板，模条，磁珠，芯片等)来固定一种抗体，而另一种抗体一般标记有示踪物质(如酶，荧光分子，有色分子等)。通过与被测抗原形成夹心结构后，再清洗掉没有结合到固相载体的抗原和抗体。对剩余的示踪物质进行定量测定，从而实现了对被测抗原的定量过程。

但该方法存在一个问题，就是由于固相载体的存在，使产品的生产成本较高，其中高质量的磁珠成本经常达到试剂总成本的一半以上。而且固相载体的清洗，分离对自动化的仪器要求比较高，所以目前几乎所有的自动化免疫仪器都相当庞大和复杂，使免疫测定的成本一直居高不下。

酶促化学发光中有一个很重要的现象，就是存在一些对化学发光有显著增强效果的化合物，被称之为“增强子”。当增强子存在时，化学发光的信号值会实现几千几万倍的提升。一直以来，增强子都是作为发光底物的一个成分来使用的。即先将抗体固定在固相载体上，并且另外制备用酶来标记的抗体；检测时将两种抗体混合并加入待测抗原，形成抗体包被固相载体-抗原-酶标记抗体的夹心结构，然后洗涤除去未结合的抗原和酶标记抗体，加入增强剂和发光底物，使其发光，通过检测光信号来计算抗原浓度。这种方法存在一定缺陷：第一是如上所述的固相载体的存在提高了仪器复杂性，第二是仍然需要洗涤过程，使检测过程非常复杂。

申请号为CN201010616899.1的专利申请文件公开了一种非分离式测定方法，将增强子标记在抗体1上，发光底物标记在抗体2上，而酶溶解在溶液中。这种方法虽然也不需要洗涤步骤，但是也有明显的缺陷，第一是发光底物的量非常少，发光很快就结束了，对于仪器的信号接收很不利，发射光子数总量少，所以灵敏度偏低；第二是与经典成熟的酶标记技术不同，将发光底物有效地标记到抗体上有较高的技术难度，造成本方法难度较大，成本偏高。而且该方法适用的发光底物十分特殊，合成难度很大，不利于本方法的推广和应用。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种利用化学发光增强子修饰的抗体与酶标抗体结合检测目标物的方法。本发明将酶促化学发光的增强子和酶各自修饰到一抗和二抗上，实现了崭新的均相免疫分析手段。

本发明的技术方案如下：

一种利用发光增强子修饰的抗体检测目标物的方法，包括以下部分：

与目标物有结合能力的抗体1，其中抗体1上标记了增强子；

与目标物有结合能力的抗体2，其中抗体2上标记了酶；

抗体1、抗体2的溶液在使用时与发光底物溶液混合，用于目标物的检测；通过测定化学发光信号的高低来测定目标物的浓度。

所述的目标物包括且不限于蛋白质、激素、DNA、RNA、小分子化合物。

所述的抗体1及抗体2是对目标物有结合能力的蛋白质，抗体1与抗体2可以相同也可以不相同。

所述的增强子为对化学发光信号有增强作用的化合物。

所述的增强子包括且不限于以下化合物：吩噁嗪类化合物、对碘苯酚类化合物，杂环类化合物，羧酸类化合物，硼酸类化合物。