[发明专利]一种快速区分猪德尔塔冠状病毒和猪嵴病毒的多重PCR检测引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201810130493.9 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108060272A | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | 焦文强;徐引弟;赵珺;王克领;王治方;李宗杰;张璐璐;孙宗琦;王方明;郎丽敏;周昌龙;张立宪;游一;许峰 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙) 41122 | 代理人： | 徐文婷 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 区分 猪德尔塔 冠状病毒 病毒 多重 pcr 检测 引物 试剂盒 | ||
1.一种快速区分猪德尔塔冠状病毒和猪嵴病毒的多重PCR检测引物组，其特征在于，所述引物组包括4条特异性引物，具体为：
L1：5ˊ-CCTGACACCAACCTGCAGCG-3ˊ
L2：5ˊ-GCCCAATGAGTGTACGTCATGCGCTG-3ˊ
L3：5ˊ-AGTAGTCCCTACTACTGACGCGT-3ˊ
L4：5ˊ-CTACGCTGCTGATTCCTGCT-3ˊ。
2.一种如权利要求1所述的引物组在制备快速区分猪德尔塔冠状病毒和猪嵴病毒试剂盒中的应用。
3.一种快速区分猪德尔塔冠状病毒和猪嵴病毒的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的多重PCR检测引物组。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括病毒RNA的提取试剂、反转录试剂、PCR扩增试剂、和/或琼脂糖凝胶电泳试剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述反转录试剂包括10×M-MLV缓冲液、dNTP、M-MLV反转录酶、RNase酶抑制剂、L2、L4引物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述反转录试剂所构建的反转录体系为：10×M-MLV缓冲液2.0μL、2.5mmol/L dNTP 2.0μL、200U/μL M-MLV反转录酶0.5μL、40U/μL RNase酶抑制剂0.3μL、10mmol/L L2、L4引物0.3μL、RNA模板4.9μL。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、L1引物、L2引物、L3引物、L4引物、Taq DNA聚合酶和双蒸水。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂所构建的PCR扩增体系为：10×PCR扩增缓冲液5.0μL、2.5mmol/μL dNTP 8.0μL、10mmol/L L1、L2、L3、L4引物各1.0μL、5U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL、cDNA模板3.0μL，补加双蒸水至50.0μL。
9.一种如权利要求3-8任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括病毒RNA的提取、反转录、PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳。
10.根据权利要求9所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，还包括对琼脂糖凝胶电泳的结果进行分析：当扩增片段为743bp，则样本为猪嵴病毒；当扩增片段大小为1017bp，则样本为猪德尔塔冠状病毒。
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