[发明专利]用于检测眼内液中白色念珠菌的LAMP引物组合及应用

说明书

本发明公开了一种用于检测眼内液中白色念珠菌的LAMP引物组合及应用。本发明提供的引物组合，由序列1至6所示的6条单链DNA分子组成。本发明还保护所述引物组合在检测白色念珠菌中的应用。本发明还保护检测待测样本是否感染了白色念珠菌的方法。应用本发明的LAMP引物及方法，可快速、准确的检测出白色念珠菌。

技术领域

本发明涉及一种用于检测眼内液中白色念珠菌的LAMP引物组合及应用。

背景技术

真菌性眼内炎是一种对视力威胁极大的感染性眼部疾病，致盲率高，发病潜伏期长，通常数周甚至数月。早期临床症状不明显，诊断困难，因此，在临床上，尤其发病初期常被误诊而贻误治疗。临床抗真菌药物疗效不足且不良反应较大，真菌对眼部组织破坏性强等原因导致真菌性眼内炎的预后差。近年来，随着术后及慢性炎症大量滥用皮质类固醇激素、抗菌素及免疫制剂，致使人体菌群失调，免疫功能下降，真菌性眼内炎发病率逐年上升。真菌性眼内炎分为内源性眼内炎和外源性眼内炎两种。内源性真菌性眼内炎是由真菌通过血行播散到达眼部引起眼内感染所致，患者通常有长期使用激素、抗生素或免疫抑制剂，或糖尿病、恶性肿瘤、免疫缺陷等病史。最常见的致病真菌为白色念珠菌和曲霉菌。外源性真菌性眼内炎继发于穿通性眼外伤、内眼手术后或真菌性角膜炎，继发于内眼手术后的真菌性眼内炎多由曲霉菌引起。

白色念珠菌(Monilia albican或canidia Albicans)又称白假丝酵母菌，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式(芽生菌丝相)侵入细胞引起疾病。念珠菌眼内炎症通过血行播散或手术时直接接种感染，表现为视物模糊、漂浮盲点和眼痛。

目前临床针对真菌的检测方法主要是分离培养、涂片镜检和血清学诊断。这些检测方法繁琐，检测时间长，阳性率低，且容易发生漏检和错检，无法满足临床快速检测的要求。近几年发展起来的分子检测技术，特别是PCR技术，在微生物快速鉴定和检测方面的应用，为真菌的快速检测开辟了新的途径。但是，PCR存在检测时间长、易污染、假阳性率高的缺点，使其应用受到限制。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermalamplification，LAMP)是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的核酸扩增技术，其原理是在一种具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下，识别6-8个区域的4-6条引物，在等温条件下快速、特异地扩增目的基因，可推广应用于快速、准确的检测真菌。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测眼内液中白色念珠菌的LAMP引物组合及应用。

本发明提供了引物组合，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；

所述引物F3为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物B3为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；