[发明专利]基于含硼梳形聚合物图案化靶板富集、除盐和鉴定糖肽的方法

权利要求书

1.一种利用疏水—亲水—疏水区域结构的封闭图案化表面对生物样品进行在线免水洗除盐和同步富集的方法，其特征是它包括如下步骤：

步骤1、合成1，4-苯乙炔-2，5-苯乙酰苯硼酸基醚梳形分子刷；

步骤2、在基底上构筑疏水—亲水—疏水区域的封闭图案化表面；

步骤3、将1μL多肽或蛋白溶液滴在上述步骤制备的图案化表面上，在室温下自然晾干，从而得到干燥的样品点；在自然晾干的过程中，由于图案化表面的中央疏水区域对蛋白或多肽有很强的疏水相互作用而对无机盐污染物的吸附很弱，从而使无机盐污染物被大部分转移到亲水区域，而多肽或蛋白则被吸附到中央疏水区域；

步骤4、滴加0.5μL 2，5-二羟基苯甲酸和基质在上述干燥的样品点上，基质室温下自然晾干后，在图案化表面上形成样品和基质均匀的共结晶；在此过程中，少部分原先残留在中央疏水区域的无机盐污染物会重新溶解在水溶液里，从而被进一步带到亲水区域，而蛋白或多肽仍能保留在中央疏水区域；

其中2，5-二羟基苯甲酸的浓度为20mg/ml，基质的组成为乙腈、水和H₃PO₄，它们的体积比为50/49/1；

步骤5、无需额外的水洗除盐步骤也无需过量的基质溶液除盐，将上述步骤富集除盐后的样品直接进行MALDI-TOF MS的分析和检测。

2.根据权利要求1所述利用疏水-亲水-疏水区域结构的封闭图案化表面对生物样品进行在线免水洗除盐和同步富集的方法，其特征是：其中，步骤1中合成1，4-苯乙炔-2，5-苯乙酰苯硼酸基醚梳形分子刷包括如下步骤：

A.将2，5-二碘对苯二酚、2-丁酮、碳酸钾和溴乙酸乙酯被放置在一个圆底烧瓶中回流加热24h，混合物冷却至室温，移除溶剂，粗产物从乙酸乙酯和正己烷的混合物重结晶，得到无色固体二碘单体2；

B.将二碘单体2和三甲基乙炔基硅溶解在四氢呋喃和三乙胺置于圆底烧瓶中，溶液用氩气吹扫15分钟，加入催化剂二(三苯基磷)二氯化钯和CuI，混合物在室温下搅拌24h，混合物过滤去除铵盐和真空除去溶剂，固体残渣溶解在四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵，反应混合物在室温下搅拌10分钟，在真空中移除溶剂，产品用硅胶柱分离，洗脱液为1︰3乙酸乙酯/己烷，得淡黄色固体3；

C.将A步骤得到的固体2和B步骤得到的固体3溶解在氯仿和三乙胺中，加入催化剂(Ph₃P)₂PdCl₂和碘化铜，反应混合物在50℃下氩气保护中搅拌72h，反应结束后，将反应混合物慢慢地添加到乙醚中，过滤析出的沉淀，用热乙醚洗涤，得到橙色固体4；

D.将C步骤得到的固体4和氢氧化钠溶解在甲醇中，搅拌回流24h，在冰箱里冷却过夜，沉淀过滤后，用甲醇和乙醚洗涤，用稀盐酸调节pH至4左右，有沉淀析出，水洗干燥后，得到黄色粉末5；

E.将D步骤得到的黄色粉末5和3-氨基苯硼酸溶解在DMF中，室温下搅拌反应24h，加入大量的水，沉淀过滤，得黄色粉末状聚1，4-苯乙炔-2，5-苯乙酰胺苯硼酸基醚梳形分子刷，PPA-EAPBA梳形分子刷。