[发明专利]一种基于拉曼光谱-重水同位素标记的耐药菌药敏性快速检测方法和判断合理用药的方法

说明书

本发明公开了一种基于拉曼光谱‑重水同位素标记的耐药菌药敏性快速检测方法和判断合理用药的方法。针对传统药敏检测需时长的缺点，该发明利用抗生素作用下耐药菌和敏感菌活性不同，从而C‑D拉曼峰强度不同的原理，实现了0.5至1小时内的药敏性快速检测。将待检物在含有重水的培养液中孵育，其中含抗生素的作为处理组，不含抗生素的作为对照组，将孵育后的待检物离心清洗后进行拉曼检测，分别计算处理组和对照组的C‑D/(C‑D+C‑H)，并以处理组与对照组的比值作为判别标准，小于等于0.75判断为对抗生素敏感，大于0.75判别为对该抗生素耐药。所述方法快速、操作和分析简便、适于不同抗生素和不同细菌，具有临床应用前景。

技术领域

本发明涉及生化检测分析技术领域，尤其涉及一种基于拉曼光谱-重水同位素标记的耐药菌药敏性快速检测方法和判断合理用药的方法。

背景技术

抗生素的发明是医学史上最重要的进步之一，抗生素的使用有效控制了细菌感染，挽救了无数生命。医疗卫生领域占据了抗生素使用的半壁江山(另一半是养殖业)。然而，抗生素的不合理使用问题非常突出。随着抗生素的大量使用，细菌耐药问题日趋严重，导致细菌感染无法有效治愈，并在世界范围内呈现加剧的趋势，不同国家包括发达国家(英国、美国)陆续发现了可抵抗几乎所有抗生素的超级细菌，一旦感染将无药可医，严重威胁了人类健康。2011年世界卫生组织(WHO)已将细菌耐药性作为21世纪威胁人类健康的最大挑战之一。根据一个独立研究委员会的报告，如果抗生素耐药得不到有效控制，到2050年全球每年耐药感染的死亡人数可达1000万，远远超出癌症所导致的死亡数。抗生素耐药将造成全球GDP损失累计达10万亿美元。我国是世界上最大的抗生素生产和消费大国，面临的抗生素耐药问题相比世界范围更为严重。为积极应对细菌耐药带来的挑战，提高抗菌药物科学管理水平，遏制细菌耐药发展与蔓延，维护人民群众身体健康，促进经济社会协调发展，2016年8月，国家卫生计生委、发展改革委等14个部门联合印发了《遏制细菌耐药国家行动计划(2016-2020年)》。

在医学诊断上，标准的药敏检测方法是基于纯培养，即通过检测抗生素对细菌生长的最小抑制浓度(MIC)，或者抑菌圈的大小，来判断细菌的抗生素敏感性或耐药性。但是该方法非常费时，通常需要24小时甚至一周。在临床上，没有足够时间进行药敏检测，尤其对于病情严重的病例，并且一些细菌感染引起的死亡率随着时间延长快速增加。医生通常根据经验选择针对不同耐药菌的抗生素，或者直接选择广谱抗生素，即对多种细菌具有效力的抗生素。抗生素的错误使用会导致耐药病原菌富集，良性敏感菌死亡，加速病情恶化。而利用用广谱抗生素，虽一时有效，却加剧了宿主的耐药性，导致日后的无药可医。

耐药菌药敏快速检测技术对抗生素的合理使用非常重要，不仅有助于快速对症(针对不同耐药菌)下药，避免抗生素错用和滥用问题，达到高效治疗效果。而且，可大大遏制抗生素耐药问题。目前，抗生素耐药菌药敏快检技术正不断涌现，包括光谱法(拉曼、红外、受激拉曼)、微流控芯片细菌显微观察法、电化学法和原子力显微镜法等。上述方法可以实现0.5至5小时内药敏性的快速检测，但距离临床使用要求还有很大距离。例如，光谱技术结合多元变量统计分析，涉及到大量数据的统计分析，分析复杂，远不如可视化便捷。受激拉曼虽然可在一定程度上可视化，但仪器昂贵复杂，不普遍。直接观察微流控芯片中细菌在抗生素作用下生长速率或分裂过程中的形态变化，来判断耐药菌，是一个可视化检测，但是对于含有多种菌的真实样品，在判断生长速度或形貌上具有局限和误差。电化学和原子力方法的检测通量太低。

综述所示，目前仍然缺乏快速、操作简便、具有临床应用前景的耐药菌药敏性快速检测技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速、简便、具有临床应用前景的基于拉曼光谱-重水同位素标记的且可快速指导合理用药的耐药菌药敏性快速检测方法。