[发明专利]一种用于细胞核染色的核酸荧光探针及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于细胞核染色的核酸荧光探针化合物AzosD的制备方法，特征是将6‑氨基‑2‑甲基喹啉溶于乙腈中，加入N‑溴代琥珀酰亚胺反应，得到中间体1；将其溶于水、乙醇和甲苯混合溶液中，加入3‑(N,N‑二甲氨基)苯硼酸、四(三苯基膦)钯和碳酸钠，氮气保护下回流反应得到中间体2；用盐酸溶解中间体2，在冰水浴条件下将亚硝酸钠加入至上述溶液，用氢氧化钠水溶液调节溶液的pH至中性，分离提纯即得到3‑甲基‑11‑(N,N‑二甲氨基)噌啉并[3,4‑e]喹啉，即AzosD；其具有抗光漂白效果好、生物相容性高、抗酶解能力强、细胞核的靶向性高，可应用于活体细胞中细胞核的特异性染色。在细胞核形态的长时间监测和细胞生理过程中细胞核形态变化的观测领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于细胞核荧光探针技术领域，具体涉及一种用于细胞核染色的核酸荧光探针3-甲基-11-(N,N-二甲氨基)噌啉并[3,4-e]喹啉(AzosD)及其制备方法。

背景技术

随着科学技术的发展，人类对细胞核的认识越来越深刻。细胞核是真核细胞内最大、最重要的细胞器，是细胞遗传与代谢的调控中心。细胞核是细胞的控制中心，在细胞的代谢、生长、分化中起着重要作用，是遗传物质的主要存在部位。核酸是与生命活动和疾病密切相关的生物大分子。因此，细胞核的染色、追踪及形态观察对于了解整个细胞的生命过程具有重要的意义。

对细胞核的成像通常采用荧光靶向成像的方法[J.Yan,W.He,N.Li,M.Yu,Y.Du,B.Lei,P.X.Ma,Biomaterials 2015,59,21-29.]。目前已经商业化的细胞核靶向荧光染料包括溴化乙锭、碘化丙啶、DAPI、Hoechst等。这些荧光染料对细胞核具有特异性的染色作用。然而，这些荧光染料在溶液状态，通常面临着易于发生光漂白、生物毒性大、抗生物代谢能力低等问题。因此，期待开发具有较高的荧光量子产量、良好的生物相容性、高的光稳定性及抗酶解代谢、且长时间稳定定位于细胞核的荧光染料。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于细胞核染色的核酸荧光探针及其制备方法，以克服现有技术的上述缺陷。

本发明的用于细胞核染色的核酸荧光探针化合物AzosD，其特征在于是结构式为

的3-甲基-11-(N,N-二甲氨基)噌啉并[3,4-e]喹啉(AzosD)。

其核磁共振氢谱是：¹H NMR(400MHz,CDCl₃,TMS):δ＝9.36(d,J＝8.7Hz,1H),8.68(d,J＝9.1Hz,1H),8.56(d,J＝9.4Hz,1H),8.25(d,J＝9.1Hz,1H),7.70(d,J＝2.6Hz,1H),7.51(d,J＝8.7Hz,1H),7.43(d,J₁＝2.6,J₂＝9.4Hz,1H),3.28(s,6H),2.85(s,3H)ppm；

其核磁共振碳谱是：¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,TMS):δ＝159.4,151.7,149.2,144.3,142.6,134.9,132.7,131.6,131.0,123.9,122.3,121.7,117.6,116.9,101.3,40.5,25.0ppm；

其高分辨质谱是：HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺calcd.for C₁₈H₁₇N₄:289.1448；found289.1449。

本发明的用于细胞核染色的核酸荧光探针化合物AzosD的制备方法，其特征在于：