[发明专利]一种人副流感病毒核酸免提取基因分型检测试剂盒

权利要求书

1.一种人副流感病毒核酸免提取、快速基因分型检测试剂盒，其特征在于：包括PCR扩增试剂和对照试剂，所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和HPIV1/2/3/4引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成。

2.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应缓冲液A的成分为50mM Tris-HCl、75mM KCl、3.5mM MgCl2、10mM DTT、3％甲酰胺、0.3mg/ml BSA，所述的酶系B主要由HotStart Hi Taq DNA聚合酶、Super-M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂构成，所述的HPIV1/2/3/4引物探针混合液主要由标记不同荧光报告基团的人副流感病毒1/2/3/4的探针和引物按照一定的浓度组合而成。

3.根据权利要求2所述的PCR反应缓冲液A中加入3％甲酰胺，作为离子表面活性剂，主要用来破坏细胞膜、释放核酸，使蛋白变性；所述的0.3mg/ml的BSA主要保护taq酶的稳定性和活性，作为PCR的增强剂；所述的RNA酶抑制剂主要是用来防止RNA酶降解裂解的RNA，便于后期cDNA的形成和扩增，其他成分均作为RT-PCR正常扩增成分。

4.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的HPIV1型、HPIV2型、HPIV3型、HPIV4型的探针和引物的具体序列和序号如下：

HPIV 1型上游引物：

AGAACTAGGTGTGACAGACACA SEQ ID NO.1

HPIV 1型上下游引物：

CCCTATCAGCRGTGTCCT SEQ ID NO.2

HPIV 1型上探针：

5’-荧光报告集团-CCACTTCTATRGCTCCACCACCTGTG-荧光淬灭集团-3’SEQ ID NO.3

人副流感病毒2型

HPIV 2型上游引物：

GGCAATGGGCCACAATCAATC SEQ ID NO.4

HPIV 2型下游引物：

GCGACCACCATATACAGGAAAT SEQ ID NO.5

HPIV 2型探针：

5’-荧光报告集团-CCTAGATGATAGATCCCGCTTCCAACTG-荧光淬灭集团-3’SEQ ID NO.6

HPIV 3型上游引物：

CATTCATCTGTATCCTCAGAG SEQ ID NO.7

HPIV 3型下游引物：

CCACTCCCATTGCATAACTCC SEQ ID NO.8

HPIV 3型探针：

5’-荧光报告集团-AGTTGCCTGGTGCGAACTCACCATG-荧光淬灭集团-3’SEQ ID NO.9

人副流感病毒4型

HPIV4型上游引物：

CTGAAGAGAGAMGRCTGGCYAAG SEQ ID NO.10

HPIV4型下游引物：

AATTTTCCTKGCATCTGTTTG SEQ ID NO.11

HPIV4型探针：

5’-荧光报告集团-TCYAACATCCTRCCCTGCTGCTTGT-荧光淬灭集团-3’SEQ ID NO.12。

5.根据权利要求1所述的一种人副流感病毒核酸分型检测试剂盒，其特征在于：所述的荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5荧光报告基团，所述的淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA荧光淬灭基团。