[发明专利]一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法

权利要求书

1.一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，包括亲和层析和病毒灭活步骤，其特征在于，具体包括以下步骤：

（1）对细胞培养液上清进行亲和层析：平衡、上样、洗涤、洗脱过程；平衡缓冲液为pH7.0-7.4含盐的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液；所述洗涤过程包括三步洗涤，首先用平衡缓冲液复平衡，然后用pH8.0~8.5含盐的Tris-盐酸缓冲液进行洗涤，再用pH4.5~5.5甘氨酸-盐酸缓冲液进行洗涤；洗脱缓冲液为pH2.7~3.1甘氨酸-盐酸缓冲液；

所述的盐为氯化钠、氯化钾、或氯化铵的一种；平衡缓冲液中含盐浓度为0.15mol/L，第二步洗涤缓冲液含盐浓度为0.15~0.5mol/L；

（2）收集上述洗脱流出液，加入蔗糖，搅拌至完全溶解；蔗糖与洗脱流出液的质量体积比为0.02~0.08:1，其中质量以g计，体积以ml计；

（3）将步骤（2）所得样品调pH进行低pH病毒灭活。

2.根据权利要求1所述的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述的甘氨酸-盐酸缓冲液替换为组氨酸-盐酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，在亲和层析和病毒灭活纯化步骤后，进行离子交换层析进一步纯化使得聚体含量降低到0.3%以下。