[发明专利]一种基于壳聚糖的可调控抗原释放速率的纳米疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明属于医药技术领域，提供了一种基于壳聚糖的可调控抗原释放速率的纳米疫苗及其制备方法和应用。该纳米颗粒通过快速纳米络合的方法制备，其可实现对抗原的高效共包裹。该纳米疫苗以蛋白作为抗原；在特定pH值下改变壳聚糖和三聚磷酸钠的比例制得表面电荷、纳米粒径、载药量均相同的纳米疫苗，其对抗原的释放速率不同；抗原释放快的纳米疫苗促进抗原的呈递，进而诱导机体产生更强的免疫应答，能够更有效地抑制肿瘤的生长。所述纳米疫苗易于制备、成份可控、可大批量连续生产。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体地，涉及一种基于壳聚糖的可调控抗原释放速率的纳米疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

癌症已经成为严重威胁人类健康的疾病，在癌症预防和治疗领域，疫苗已经展现出来极大的希望。随着免疫学的不断深入研究、日益成熟的基因工程技术以及合成技术的飞速发展，人类已研制出多种DNA重组疫苗、短肽疫苗等新型疫苗。这些新兴的疫苗虽然有很多优点，例如易于合成、提纯、抗原特异性强，但其较弱的免疫原性却成为其致命的缺点，导致其不能诱发强有力的免疫反应，限制了其在临床上的使用。在实际应用中，其往往需用免疫佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的特异性应答；但这些疫苗佐剂存在毒副作用大，体内易降解等缺点。由于癌症的年轻化趋势以及老年群体对癌症的易感性，提高年轻机体和老年机体的免疫应答尤为重要。然而，目前的疫苗尚不能诱导有效的免疫应答来对抗癌症，尤其是在老年机体中。

生物材料已经被用来提高其安全性和效率，如乳液、水凝胶和微粒，但这些材料均容易引起机体发生T细胞的免疫耐受和耗竭。然而，纳米颗粒作为抗原的载体可靶向输送疫苗至特定组织，如淋巴结；延缓抗原的降解；降低佐剂的毒副作用。壳聚糖是带正电的天然多糖，自然界含量丰富，生物相容性良好，价格便宜。基于壳聚糖的纳米颗粒制备可在水相中通过正负电交联的方式完成，并实现对生物制剂的高效包载以及高效地保留生物制剂的生物活性。因此，我们利用快速纳米络合技术制备基于壳聚糖的纳米疫苗。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种负载蛋白抗原和疫苗佐剂的纳米颗粒。

本发明的另一个目的是提供一种负载蛋白抗原和疫苗佐剂的纳米颗粒的制备方法。

一种负载蛋白抗原和疫苗佐剂的纳米颗粒，利用带正电荷的平均分子量90 K的壳聚糖，与带负电的三聚磷酸钠交联包裹抗原形成纳米疫苗。

本发明纳米颗粒中的壳聚糖在pH = 5.3条件下具有良好的水溶性，可与不同质量比的三聚磷酸钠交联形成纳米颗粒；（鸡卵清白蛋白）OVA作为一种模式蛋白。

优选地，所述壳聚糖的平均分子量为50 kDa～90 kDa (优选为90 kDa)，其可与三聚磷酸钠交联形成稳定的纳米颗粒。

优选地，所述纳米疫苗的粒径为50～200 nm（优选为50 nm）。

优选地，所述纳米疫苗的PDI为0.1～0.2。

优选地，所述纳米疫苗的电位为-5 mV～-30 mV。

优选地，所述纳米疫苗的载药量为10%～30%。

优选地，所述纳米疫苗还包含药学上可接受的赋形剂。

优选地，所述纳米疫苗为冻干制剂。

本发明还请求保护所述纳米颗粒在制备抗肿瘤药物中的应用。

一种抗肿瘤纳米疫苗制剂，包含上述任一所述的负载抗原的纳米颗粒。

本发明负载抗原具有靶向淋巴结的功能，提高了疫苗在淋巴结内的富集，提高了疫苗被抗原呈递细胞的摄取，抗原释放速度快的纳米疫苗促进了抗原的呈递，提高了机体的抗原特异性Th1型免疫应答，以及记忆性免疫应答，在癌症预防的应用中展现出了良好的效果。所述纳米疫苗可高效包裹抗原，可连续大批量生产，成分明确。