[发明专利]用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法

说明书

本发明公开了一种用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法。其中，富集星形胶质细胞来源的外泌体该方法包括以下步骤：(a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及(b)通过免疫复合物采用固相或液相的方法富集星形胶质细胞来源的外泌体。可检测星形胶质细胞来源的外泌体的生物标记物，用于辅助诊断、鉴别诊断和监测中枢神经系统疾病如，阿尔茨海默病、帕金森病、多系统萎缩、朊病毒病和神经系统肿瘤例如胶质瘤等，避免通过创伤性操作获取标记物。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法。

背景技术

用于辅助诊断、鉴别诊断和监测中枢神经系统疾病如，阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、多系统萎缩(MSA)和朊病毒病的生物标志物需求十分迫切。目前的生物标志物中，表现较好的标志物均是基于脑脊液(CSF)进行开发的。CSF直接接触脑和脊髓，能够更好地反应中枢神经系统的改变。但CSF的获取是创伤性操作，这严重限制了脑脊液生物标志物的常规应用。因此，中枢神经系统疾病的外周生物标记物(例如在血液中)研发十分重要。然而，由于血脑屏障的存在，在外周体液中很难检测到中枢神经系统(如星形胶质细胞)来源的成分。例如，在血浆中仅可以容易检测小部分的人脑/CSF来源蛋白质(Pan et al,J.Proteome Res.,13:4535-4545,2014)。鉴于以上原因，虽然花费了几十年的时间和大量的经费，目前还没有确立针对AD、PD、MSA或朊病毒病的外周生物标志物。另外，当使用现有的技术测量外周生物体液中的tau、Aβ、α-syn等疾病相关蛋白时，外周来源的蛋白质会显著影响中枢神经系统疾病的信号。

因此，如何从外周生物体液中富集和标记能够反映中枢神经系统疾病变化的生物标志物是本发明的焦点。

发明内容

本发明旨在提供一种用于从生物体液中富集或检测星形胶质细胞来源的外泌体的方法，以解决现有的用于辅助诊断、鉴别诊断和监测中枢神经系统疾病的生物标志物获取属于创伤性操作而不能进行常规应用的技术问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于从生物体液中富集星形胶质细胞来源的外泌体的方法。该方法包括以下步骤：(a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，生物体液是选自血液、血清、血浆和唾液中的一种或多种；以及(b)通过免疫复合物采用固相或液相的方法富集星形胶质细胞来源的外泌体。

进一步地，步骤(b)包括，通过免疫复合物将生物体液中的星形胶质细胞来源的外泌体结合于固相；从生物体液中分离固相结合的外泌体以富集星形胶质细胞来源的外泌体。

进一步地，将在步骤(a)中的抗GLT1抗体固定在固相上。

进一步地，该方法还包括从固相洗脱结合的外泌体的步骤(c)。

进一步地，抗GLT1抗体为经过标记的抗体，步骤(b)包括，通过流式细胞仪富集星形胶质细胞来源的外泌体。

进一步地，抗GLT1抗体为经过荧光标记物、同位素、酶标记物、化学发光剂或量子点标记的抗体。

根据本发明的另一个方面，提供了一种抗GLT1抗体在制备用于在生物体液中检测神经系统疾病的星形胶质细胞来源的生物标记物的制剂中的用途。该用途包括以下步骤：(a)使含有星形胶质细胞来源的外泌体的生物体液接触抗GLT1抗体以形成免疫复合物，其中，生物体液是选自血液、血清、血浆、唾液和尿液中的一种或多种；以及(b)确定星形胶质细胞来源的生物标记物的水平。

进一步地，生物标记物是核酸、蛋白质、脂类或星形细胞来源外泌体本身。