[发明专利]一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述新型活化剂包括以下重量组分：20-26％生物导电纳米纤维、1-3％发电细胞、3-4％凝胶混合溶液、9-11％复合激动剂、12-14％人工细胞膜、0.3-0.8％细胞膜激活物、8-10％特异性抗体，余量为培养基液；

所述复合激动剂按照重量百分比包括：0.2-0.9％青蓝霉素A、0.1-0.3％环孢菌素、2-5％特异性半胱氨酸蛋白酶、1.3-2.5％银杏黄酮甙、3.6-5.4％白果内酯、0.7-1.4％三叶青提取物、0.4-0.7％木酚素、3.2-6.7％可溶性蛋白多糖，余量为白介素2；

所述培养基液按照重量百分比包括：4.5-6.8％脐带提取物、1.2-2.6％纤维蛋白原、0.5-1.2％凝血因子、0.3-0.6％三碘甲状腺原氨酸、3.5-5.0％％谷胱甘肽、4.7-5.3％壳寡糖、3.1-6.0％牛磺酸、2.0-4.5％维生素C、2.2-3.6％柠檬酸锌、1.5-3.7％尿囊素、2.6-4.9％不饱和脂肪酸、7.6-9.4％平衡盐溶液，余量为DMEM基础培养介质。

2.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维包括以下重量组份：40-60份碳纳米管、11-13份聚多巴胺、7-9份聚吡咯、30-50份N-甲基吡咯烷酮、24-35份丝素蛋白、13-22份胶原、8-10份乳酸乙醇酸共聚物。

3.如权利要求1或2所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维的制备方法包括以下步骤：

S1：将所述碳纳米管、聚多巴胺、聚吡咯溶解在所述N-甲基吡咯烷酮中，形成导电材料溶液；

S2：将所述丝素蛋白、胶原、乳酸乙醇酸共聚物进行混合得到生物材料溶液；将所述导电材料溶液与所述生物材料溶液利用超声波进行分散混合均匀，得到生物导电材料溶液；

S3：再利用静电纺丝技术将所述生物导电材料溶吹成生物导电纤维丝；

S4：将所述生物导电纤维丝放置在真空干燥箱内，在60-80℃温度下低温干燥24-30h，即得生物导电纳米纤维。

4.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述生物导电纳米纤维包括以下重量组份：40-60份碳纳米管、11-13份聚多巴胺、7-9份聚吡咯、30-50份N-甲基吡咯烷酮、24-35份丝素蛋白、13-22份胶原、8-10份乳酸乙醇酸共聚物。

5.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述发电细胞来自电鳗、电鳐、电鲶中的任意一种。

6.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述人工细胞膜是由以下重量组分组成：34-40％卵磷脂、12-15％胆固醇、0.1-0.5％抗坏血酸四异棕榈酸、1.2-2.3％维生素E酯、2.5-3.6％酯丙酮酸钠、1.3-1.8％鸟氨酸、1.0-1.6％脯氨酸、2.8-4.1％二硬脂酰磷脂酰甘油、余量为去离子水。

7.如权利要求1所述的一种用于免疫细胞扩增的新型活化剂，其特征在于，所述新型活化剂的制备方法包括以下步骤：

(1)负载复合激动剂：将所述白介素2、青蓝霉素A、环孢菌素、特异性半胱氨酸蛋白酶、银杏黄酮甙、白果内酯、三叶青提取物、木酚素、可溶性蛋白多糖按照上述比例进行混合，得到复合激动剂；再将所述生物导电纳米纤维裁切成2-5mm的生物导电纳米纤维棒并利用紫外线消毒处理10-20min，取消毒后的70-80％的生物导电纳米纤维棒与所述复合激动剂进行混合均匀，利用超声波进行分散负载，直至复合激动剂完全负载在生物导电纳米纤维棒上；

(2)制备液态人工细胞膜：将卵磷脂、胆固醇、抗坏血酸四异棕榈酸、维生素E酯按照上述比例进行混合形成疏水性混合物，所述疏水性混合物以1:2-3的体积比溶解在混合有机溶剂中，得到预混物；将所述预混物进行蒸发处理，去除所述混合有机溶剂，得到磷脂膜；再将所述酯丙酮酸钠、鸟氨酸、脯氨酸、二硬脂酰磷脂酰甘油溶解于所述去离子水中，形成亲水性混合物；再将所述亲水性混合物与所述磷脂膜进行混合，机械搅拌3-5min，得到液态人工细胞膜；

(3)包膜处理：将负载有复合激动剂的生物导电纳米纤维棒加入到所述液态人工细胞膜中，并利用超声波包覆技术，将负载有复合激动剂的生物导电纳米纤维棒外层均匀包覆上液态人工细胞膜，得到包膜生物导电纳米纤维棒；

(4)添加特异性抗体：将所述细胞膜激活物加入到所述包膜生物导电纳米纤维棒中，培养活化1-2h后加入所述特异性抗体，使特异性抗体与包膜生物导电纳米纤维棒进行30-60min特异结合，得到带有抗体的生物导电纳米纤维棒，待用；

(5)种植发电细胞：从所述电鳗、电鳐、电鲶中分离发电细胞，并将所述发电细胞与所述凝胶混合溶液按照上述比例进行混合均匀，得到混合体；并利用细胞种植术将所述混合体种植在剩下的20-30％的生物导电纳米纤维棒上，培养1-3h，得到带有发电细胞的生物导电纳米纤维棒，待用；

(6)制备活化剂：将所述脐带提取物、纤维蛋白原、凝血因子、三碘甲状腺原氨酸、谷胱甘肽、壳寡糖、牛磺酸、维生素C、柠檬酸锌、尿囊素、3D聚左旋乳酸、不饱和脂肪酸、平衡盐溶液按照上述比例加入到所述DMEM基础培养介质中，形成形成培养基液；再将所述所述带有抗体的生物导电纳米纤维棒与带有发电细胞的生物导电纳米纤维棒分别加入到所述培养基液中，得到活化剂。