[发明专利]一种促进干细胞扩增及干性维持的胶原材料及其制备方法

说明书

本发明公开了一种促进干细胞扩增及干性维持的胶原材料及其制备方法。本发明首先提供了一种胶原材料的制备方法，包括如下步骤：(1)取牛筋膜组织，去除表面的肌肉和脂肪，用水清洗；(2)置于含磷酸三丁酯的液体中浸泡；(3)置于水中浸泡并清洗；(4)置于NaCl溶液中浸泡；(5)置于水中浸泡并清洗；(6)置于表面活性剂溶液中浸泡；(7)置于水中浸泡并清洗；(8)置于NaOH溶液中浸泡；(9)置于水中浸泡并清洗；(10)进行冷冻干燥；(11)溶于醋酸溶液；(12)透析；(13)进行冷冻干燥，得到胶原材料。本发明还保护以上胶原材料在培养干细胞中的应用。本发明提供的胶原材料对于干细胞培养具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种促进干细胞扩增及干性维持的胶原材料及其制备方法。

背景技术

外源干细胞移植是组织损伤修复的重要手段，干细胞具有自我更新和分化能力，可以分化为特定类型的组织细胞，促进组织再生，同时干细胞也可以通过旁分泌作用改善损伤微环境，促进损伤修复。但是干细胞在体外扩增培养过程中，随着细胞增殖分裂时间的延长，细胞的干性会逐渐降低。因此，如何建立一种能促进干细胞扩增且保持扩增后干细胞特性的培养方法对组织损伤修复至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进干细胞扩增及干性维持的胶原材料及其制备方法。

本发明首先提供了一种胶原材料的制备方法，包括如下步骤：

(1)取牛筋膜组织，去除表面的肌肉和脂肪，用水清洗；

(2)取完成步骤(1)的组织，置于含磷酸三丁酯的液体中浸泡；

(3)取完成步骤(2)的组织，置于水中浸泡并清洗；

(4)取完成步骤(3)的组织，置于NaCl溶液中浸泡；

(5)取完成步骤(4)的组织，置于水中浸泡并清洗；

(6)取完成步骤(5)的组织，置于表面活性剂溶液中浸泡；

(7)取完成步骤(6)的组织，置于水中浸泡并清洗；

(8)取完成步骤(7)的组织，置于NaOH溶液中浸泡；

(9)取完成步骤(8)的组织，置于水中浸泡并清洗；

(10)取完成步骤(9)的组织，进行冷冻干燥，得到干燥组织；

(11)取步骤(10)得到的干燥组织，溶于醋酸溶液，然后将体系pH调至6-8；

(12)将完成步骤(11)的整个体系转移到透析袋在水中进行透析；

(13)完成步骤(12)后，收集透析袋内的整个体系，然后进行冷冻干燥，得到干粉，即为干粉状胶原材料。

步骤(1)中，所述水为去离子水。

步骤(2)中，含磷酸三丁酯的液体是将磷酸三丁酯和水混合得到的。步骤(2)中，磷酸三丁酯的浓度可为0.5g/100ml-1.5g/100ml，具体可为1g/100ml。步骤(2)中，浸泡的温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(2)中，浸泡的时间可为18小时-72小时，具体可为48小时。

步骤(3)中，所述水为去离子水。步骤(3)中，浸泡温度可为2℃-16℃，具体可为4℃。步骤(3)中，浸泡并清洗可为“每5分钟-15分钟换水，共换水10次-20次”，具体可为“每10分钟换水，共换水15次，最后一次换水10分钟后完成本步骤”。