[发明专利]抗虫耐除草剂玉米转化事件

说明书

本申请提供了抗虫耐除草剂玉米转化事件，并提供了相关的创制方法、检测方法和应用。本申请以玉米自交系祥249为受体，经过农杆菌介导的遗传转化，得到在特定基因组位点插入外源基因插入物的玉米植株，其中外源基因插入物包含以下三个基因：抗虫基因、抗草铵膦基因和抗草甘膦基因。本申请所获得的转化事件中，所插入的外源基因位于玉米基因组的非功能位点，不影响受体植物自身其他基因的表达，在使转基因玉米植物获得抗虫和耐除草剂特性的同时，保持了其良好的农艺性状。

技术领域

本申请涉及植物生物技术领域，具体涉及一种抗虫耐除草剂玉米转化事件的创制方法、检测方法和应用。

背景技术

玉米是重要的饲料和工业原料作物，其作为中国种植面积最大的农作物，长期自给有余，但自2010年以来，进口量逐年增加。

玉米螟俗称玉米钻心虫，其危害是造成玉米常年减产的重要生物灾害之一，严重影响玉米的产量和质量，包括亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)和欧洲玉米螟(Ostrinianubilalis)。中国是亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的多发区和重发区，几乎每两年就大规模发生一次。一般年份玉米受玉米螟危害减产10％-15％，大发生年减产可达30％以上，甚至绝收。因玉米螟的危害，每年损失的玉米就达600-900万吨。玉米螟不仅直接造成玉米产量损失，而且还诱发和加重玉米穗腐病的发生，使玉米的品质下降。目前防治玉米螟的主要方式仍然以农药防治为主。农药的大量使用，既增加种植成本，又破坏生态环境。田间杂草与作物竞争水、肥、光能及生长空间，同时又是危害作物病菌及害虫的中间寄主，是作物增产的重要生物限制因子之一。我国常年受杂草严重危害的农作物面积高达12亿亩，其中玉米1.9亿亩。当前，广泛采用的选择性除草剂施用量大，且残留期长、容易影响下茬作物的正常生长。草铵膦等灭生性除草剂具有高效、低毒、易降解、无残留等特点，但它们除草没有选择性，不能直接用于作物的生长期。植物转基因育种技术具有目的性强、周期短、效率高，能够实现不同物种间优良基因的转移等优点。自1996年第一个转基因作物商业化以来，这项技术已经为全球农业带来了巨大的改变。

就转基因玉米而言，以防治鳞翅目玉米螟虫的Cry1Ac、Cry1F等基因为主，除此外，亦有多个具有鞘翅目抗性的品系如MON88017等，以及利用Cry3类基因获得抗玉米根虫品系如MON863等投入商业化生产。

世界范围内，1996年至今已有40余种转Bt基因抗虫玉米被26个国家批准投入商业化生产或饲料食品加工，如美国孟山都公司的MON810、MON89034等。

发明内容

一方面，本申请提供了核酸分子，其包含：i)包含SEQ ID NO:1的第381-780位核苷酸和/或第10815-11214位核苷酸所示序列，或其片段或其变体或其互补序列；ii)包含SEQID NO:1的第381-780位核苷酸和第6239-6338位核苷酸所示序列，或其片段或其变体或其互补序列；iii)包含SEQ ID NO:1的第6239-6338位核苷酸和第10815-11214位核苷酸所示序列，或其片段或其变体或其互补序列；或者iv)包含SEQ ID NO:1的第381-780位核苷酸，第6239-6338位核苷酸和第10815-11214位核苷酸所示序列，或其片段或其变体或其互补序列。

在一实施方案中，本申请所提供的核酸分子包含SEQ ID NO:1所示序列，或其片段或其变体或其互补序列。

在另一实施方案中，本申请所提供的核酸分子，其包含以下表达盒：表达抗草铵膦基因的第一表达盒，如SEQ ID NO:1的第748-2288位核苷酸所示序列；表达抗虫基因的第二表达盒，如SEQ ID NO:1的第2620-6959位核苷酸所示序列；和表达抗草甘膦基因的第三表达盒，如SEQ ID NO:1的第6968-10892位核苷酸所示序列。