[发明专利]一种连续合成低聚异麦芽寡糖的方法

权利要求书

1.一种固定化重组酵母的制备方法，其特征在于包括如下步骤：首先制备高顺磁性微球，而后以壳聚糖包裹磁性微球，再以戊二醛处理包裹壳聚糖的磁性微球，在微球载体上接醛基，最终制备醛基修饰的包裹壳聚糖的高顺磁性载体；利用载体表面修饰的醛基与重组酵母表面的糖蛋白共价结合，同时，利用壳聚糖对酵母的吸附作用，达到固定重组酵母的效果；最后冻干得到固定化菌体，即固定化重组酵母，简称为I-Pp-ANGL-GCW61。

2.根据权利要求1所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于：

所述的重组酵母为表面展示有α-葡萄糖苷酶的重组毕赤酵母GS115/pPIC9K-ANGL-GCW61，简称为Pp-ANGL-GCW61。

3.根据权利要求2所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于：

所述的α-葡萄糖苷酶的优化核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求1所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于：

所述的醛基修饰的包裹壳聚糖的高顺磁性载体的单位质量载体的菌体固定化量为4.5～6.5g。

5.根据权利要求1～4任一项所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤：

(1)在壳聚糖乙酸溶液中加入亚铁盐水溶液，然后慢慢调节pH值并搅拌，直至有墨绿色絮状物生成为止，得到絮凝液；再微波处理，清洗，得到包裹壳聚糖的高顺磁性微球；

(2)将步骤(1)制得的包裹壳聚糖的高顺磁性微球均质后加入戊二醛溶液，室温反应，清洗，得到醛基修饰的包裹壳聚糖的高顺磁性载体；

(3)将重组酵母加入至醛基修饰的包裹壳聚糖的高顺磁性载体的重悬液中，反应后进行清洗、冻干，得到固定化菌体，即固定化重组酵母，简称为I-Pp-ANGL-GCW61。

6.根据权利要求5所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中，

所述的壳聚糖乙酸溶液中壳聚糖的浓度为1～4g/L；

所述的亚铁盐水溶液为FeSO₄·7H₂O水溶液；

所述的亚铁盐与壳聚糖的质量比为3～4：0.5～2；

所述的微波处理的条件为500～1000W微波处理15～30min。

7.根据权利要求5所述的固定化重组酵母的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中，

所述的戊二醛溶液为3％～6％的戊二醛溶液；

所述的室温反应的条件为70～100rpm室温反应1～3h后，20000rpm均质10～30s，再反应0.5～2h；

步骤(3)中，所述的反应的条件为80～100rpm，25～35℃反应2.5～4h。

8.一种固定化重组酵母，其特征在于通过权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到。

9.一种连续合成低聚异麦芽寡糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

在固定床生物反应器中填充一定量权利要求8所述的固定化重组酵母，床层上下固定滤膜以防固定化重组酵母渗漏；在一定反应温度下，将适量底物麦芽糖，以恒流泵由床层底部梯度流速泵入，固定化重组酵母与麦芽糖发生转糖苷反应，从而生成IMOs。

10.根据权利要求9所述的连续合成低聚异麦芽寡糖的方法，其特征在于：

所述的固定床生物反应器中固定化菌体填充量为50～150kg/m³；

所述的底物为25％～40％的麦芽糖；

所述的底物流速为0.9～2.0mL/min；

所述的一定反应温度为50～65℃。