[发明专利]一种检测脂联素的胶体金试纸条及其定量检测方法

说明书

本发明公开一种检测脂联素的胶体金试纸条及其定量检测方法，其中，所述检测脂联素的胶体金试纸条包括PVC衬板、硝酸纤维素膜、耦合物结合垫片、样本垫片及吸水垫片，所述PVC衬板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有耦合物结合垫片，另一端粘贴有吸水垫片，所述耦合物结合垫片上粘贴有样本垫片；所述硝酸纤维素膜上设置有测试带和控制带，所述测试带内包被有鼠抗脂联素抗体，所述控制带内包被有兔抗鼠抗体；所述耦合物结合垫片包被有胶体金标记脂联素抗体。本发明的检测脂联素的胶体金试纸条具有方便快捷，操作简单，耗时较短，便于临床推广应用等优点。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，特别涉及一种检测脂联素的胶体金试纸条及其定量检测方法。

背景技术

脂肪组织(adipose tissue)主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素(Adiponectin)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。正常人血清中脂联素的浓度范围在3～30μg/mL，占血浆蛋白总量的0.01％，不随饮食或昼夜节律而改变，女性血清中的脂联素含量大于男性。随着对脂联素研究的不断深入，已发现，脂联素在肥胖症患者和II型糖尿病患者血清中的浓度明显低于非肥胖者，其浓度的降低导致了胰岛素抵抗和高胰岛素血症，而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用，因此，脂联素与肥胖症患者II型糖尿病及冠心病的发生发展密切相关，即脂联素的明显降低预示着II型糖尿病及冠心病的发生明显增加。测定血中脂联素水平，对这些疾病的诊断和预后有重要意义。

而现有技术中一般采用酶联免疫分析试剂盒来检测脂联素浓度，虽然酶联免疫法检测的准确度较高，但是该方法检测过程繁琐，耗时较长，且样本需要批量检测，不适用于及时检测。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种检测脂联素的胶体金试纸条及其定量检测方法，具有方便快捷、操作简单、耗时较短的特点。

为实现上述目的，本发明提出的检测脂联素的胶体金试纸条，包括PVC衬板、硝酸纤维素膜、耦合物结合垫片、样本垫片及吸水垫片，所述PVC衬板上粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有耦合物结合垫片，另一端粘贴有吸水垫片，所述耦合物结合垫片上粘贴有样本垫片；所述硝酸纤维素膜上设置有测试带和控制带，所述测试带内包被有鼠抗脂联素抗体，所述控制带内包被有兔抗鼠抗体；所述耦合物结合垫片包被有胶体金标记脂联素抗体。

优选地，所述检测脂联素的胶体金试纸条还包括壳体，所述壳体上设置有加样窗口和检测窗口，所述加样窗口位于所述样本垫片处，所述检测窗口位于所述测试带和所述控制带处。

优选地，所述硝酸纤维素膜按如下步骤制备：

分别将测试带抗体原液和控制带抗体原液在4℃下以6000～13000r/min速度离心60min，吸取两种上清液；

将两种上清液分别装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，超滤浓缩后装瓶冷冻，得到测试带抗体和控制带抗体；

用pH值为6.5～6.7的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液分别稀释两种抗体，得到0.8mg/ml测试带包被液和0.8mg/ml控制带包被液；

将所述测试带包被液和所述控制带包被液分别喷涂在硝酸纤维素膜对应的测试带和控制带位置，喷涂量为1μL/cm；

再将包被好硝酸纤维素膜置于37℃温度下烘干。

优选地，所述样本稀释液包括磷酸盐缓冲液和/或Tris缓冲液。所述磷酸盐缓冲液按重量计包括：Na₂HPO₄0.263-0.376份，KH₂PO₄1.000-1.109份，NaCl6份，KCl0.2份，蒸馏水1000份；